24小时热门版块排行榜    

查看: 1579  |  回复: 15

天马0825

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达问题 已有2人参与

各位虫友,我用的是毕赤酵母Gs115表达外源蛋白,载体是pPIC9K,第一次筛选时选得两株株表达量高的,但是斜面保藏后,再进行表达时,发现表达量急剧减少,重复好几次都是,表达量没起始的高,都快一个月了,求大神指点。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

自信加努力成就人生
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天马0825

银虫 (小有名气)

没人应答  自己先顶一下
自信加努力成就人生
2楼2013-12-13 08:51:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是保藏过程中的问题,为什么用斜面保存不用甘油种。斜面容易退化,保藏的培养基是否有加抗生素?可以拿高浓度抗生素的培养基重新筛选试试。
3楼2013-12-13 16:36:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天马0825

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-13 16:36:53
是保藏过程中的问题,为什么用斜面保存不用甘油种。斜面容易退化,保藏的培养基是否有加抗生素?可以拿高浓度抗生素的培养基重新筛选试试。

谢谢!斜面保藏主要是使用时方便,还有就是重组酵母是基因重组到染色体上的,应该很稳定,载体使用的是缺陷型筛选,不用添加抗生素的。
自信加努力成就人生
4楼2013-12-16 13:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

achillesyao

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-16 13:27:55
谢谢!斜面保藏主要是使用时方便,还有就是重组酵母是基因重组到染色体上的,应该很稳定,载体使用的是缺陷型筛选,不用添加抗生素的。...

pPIC9K不是氨苄青霉素吗?转进染色体也会丢失,因为那不是它们生长必须的。挑出来的所谓单克隆,其实有很多假阳性菌聚在阳性菌的周围,一旦条件回复,菌种就有可能退化。那你的培养基是不是筛选培养基?
5楼2013-12-16 17:16:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天马0825

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-16 17:16:48
pPIC9K不是氨苄青霉素吗?转进染色体也会丢失,因为那不是它们生长必须的。挑出来的所谓单克隆,其实有很多假阳性菌聚在阳性菌的周围,一旦条件回复,菌种就有可能退化。那你的培养基是不是筛选培养基?...

你好,是有氨苄抗性 ,那是在大肠里,在酵母里,靠的是组氨酸缺陷型筛选!
自信加努力成就人生
6楼2013-12-18 23:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-12-24 18:08:36
引用回帖:
6楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-18 23:45:16
你好,是有氨苄抗性 ,那是在大肠里,在酵母里,靠的是组氨酸缺陷型筛选!...

我的意思是可以都用上,组氨酸也好氨苄也好,都用来筛选一边。酵母也可以用抗生素筛选的嘛,试试呗。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2013-12-21 13:16:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tinytan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

别人给你回答的挺好,不知道你为什么那么倔强

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2013-12-21 15:11:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天马0825

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-21 13:16:00
我的意思是可以都用上,组氨酸也好氨苄也好,都用来筛选一边。酵母也可以用抗生素筛选的嘛,试试呗。...

嗯  我知道什么意思了 谢谢哈!
自信加努力成就人生
9楼2013-12-23 21:16:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

achillesyao

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-23 21:16:26
嗯  我知道什么意思了 谢谢哈!...

希望能帮到你。不客气。
10楼2013-12-24 10:24:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 天马0825 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +5 Liwangman 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:10 by 我的船我的海
[考研] 一志愿华中师范071000,325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 304求调剂 +6 小熊joy 2026-03-14 6/300 2026-03-16 12:59 by Iveryant
[考研] 290求调剂 +5 孔志浩 2026-03-12 10/500 2026-03-16 09:01 by 余晖&
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 一志愿郑大070303,338分,求调剂 +4 dadawaf 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:20 by lsw010101
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分,求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 一志愿:武汉理工,材料工程,英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
请填处理意见