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天马0825

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达问题 已有2人参与

各位虫友,我用的是毕赤酵母Gs115表达外源蛋白,载体是pPIC9K,第一次筛选时选得两株株表达量高的,但是斜面保藏后,再进行表达时,发现表达量急剧减少,重复好几次都是,表达量没起始的高,都快一个月了,求大神指点。。。。。
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自信加努力成就人生
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天马0825

银虫 (小有名气)

没人应答  自己先顶一下
自信加努力成就人生
2楼2013-12-13 08:51:54
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是保藏过程中的问题,为什么用斜面保存不用甘油种。斜面容易退化,保藏的培养基是否有加抗生素?可以拿高浓度抗生素的培养基重新筛选试试。
3楼2013-12-13 16:36:53
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天马0825

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-13 16:36:53
是保藏过程中的问题,为什么用斜面保存不用甘油种。斜面容易退化,保藏的培养基是否有加抗生素?可以拿高浓度抗生素的培养基重新筛选试试。

谢谢!斜面保藏主要是使用时方便,还有就是重组酵母是基因重组到染色体上的,应该很稳定,载体使用的是缺陷型筛选,不用添加抗生素的。
自信加努力成就人生
4楼2013-12-16 13:27:55
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-16 13:27:55
谢谢!斜面保藏主要是使用时方便,还有就是重组酵母是基因重组到染色体上的,应该很稳定,载体使用的是缺陷型筛选,不用添加抗生素的。...

pPIC9K不是氨苄青霉素吗?转进染色体也会丢失,因为那不是它们生长必须的。挑出来的所谓单克隆,其实有很多假阳性菌聚在阳性菌的周围,一旦条件回复,菌种就有可能退化。那你的培养基是不是筛选培养基?
5楼2013-12-16 17:16:48
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天马0825

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-16 17:16:48
pPIC9K不是氨苄青霉素吗?转进染色体也会丢失,因为那不是它们生长必须的。挑出来的所谓单克隆,其实有很多假阳性菌聚在阳性菌的周围,一旦条件回复,菌种就有可能退化。那你的培养基是不是筛选培养基?...

你好,是有氨苄抗性 ,那是在大肠里,在酵母里,靠的是组氨酸缺陷型筛选!
自信加努力成就人生
6楼2013-12-18 23:45:16
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-12-24 18:08:36
引用回帖:
6楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-18 23:45:16
你好,是有氨苄抗性 ,那是在大肠里,在酵母里,靠的是组氨酸缺陷型筛选!...

我的意思是可以都用上,组氨酸也好氨苄也好,都用来筛选一边。酵母也可以用抗生素筛选的嘛,试试呗。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2013-12-21 13:16:00
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tinytan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

别人给你回答的挺好,不知道你为什么那么倔强

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2013-12-21 15:11:50
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天马0825

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-21 13:16:00
我的意思是可以都用上,组氨酸也好氨苄也好,都用来筛选一边。酵母也可以用抗生素筛选的嘛,试试呗。...

嗯  我知道什么意思了 谢谢哈!
自信加努力成就人生
9楼2013-12-23 21:16:26
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-23 21:16:26
嗯  我知道什么意思了 谢谢哈!...

希望能帮到你。不客气。
10楼2013-12-24 10:24:22
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