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天马0825

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达问题 已有2人参与

各位虫友,我用的是毕赤酵母Gs115表达外源蛋白,载体是pPIC9K,第一次筛选时选得两株株表达量高的,但是斜面保藏后,再进行表达时,发现表达量急剧减少,重复好几次都是,表达量没起始的高,都快一个月了,求大神指点。。。。。
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自信加努力成就人生
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天马0825

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-13 16:36:53
是保藏过程中的问题,为什么用斜面保存不用甘油种。斜面容易退化,保藏的培养基是否有加抗生素?可以拿高浓度抗生素的培养基重新筛选试试。

谢谢!斜面保藏主要是使用时方便,还有就是重组酵母是基因重组到染色体上的,应该很稳定,载体使用的是缺陷型筛选,不用添加抗生素的。
自信加努力成就人生
4楼2013-12-16 13:27:55
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天马0825

银虫 (小有名气)

没人应答  自己先顶一下
自信加努力成就人生
2楼2013-12-13 08:51:54
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是保藏过程中的问题,为什么用斜面保存不用甘油种。斜面容易退化,保藏的培养基是否有加抗生素?可以拿高浓度抗生素的培养基重新筛选试试。
3楼2013-12-13 16:36:53
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-12-16 13:27:55
谢谢!斜面保藏主要是使用时方便,还有就是重组酵母是基因重组到染色体上的,应该很稳定,载体使用的是缺陷型筛选,不用添加抗生素的。...

pPIC9K不是氨苄青霉素吗?转进染色体也会丢失,因为那不是它们生长必须的。挑出来的所谓单克隆,其实有很多假阳性菌聚在阳性菌的周围,一旦条件回复,菌种就有可能退化。那你的培养基是不是筛选培养基?
5楼2013-12-16 17:16:48
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