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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 毕赤酵母表达问题
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天马0825

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达问题 已有2人参与

各位虫友，我用的是毕赤酵母Gs115表达外源蛋白，载体是pPIC9K，第一次筛选时选得两株株表达量高的，但是斜面保藏后，再进行表达时，发现表达量急剧减少，重复好几次都是，表达量没起始的高，都快一个月了，求大神指点。。。。。
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自信加努力成就人生
1楼 2013-12-12 10:29:43
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jjwhl at 2014-12-21 20:24:26
楼主，我也是做毕赤酵母表达的，想问一下，在摇瓶水平下，你的目的蛋白表达量达到多少mg/L呢？还有，你是怎么筛选高酶活转化子的呢？...

我们直接测的酶活，单位U/mL。先用G418筛选高拷贝，再去表达
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自信加努力成就人生
12楼2014-12-22 16:47:39
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天马0825

银虫 (小有名气)
没人应答  自己先顶一下
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自信加努力成就人生
2楼2013-12-13 08:51:54
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是保藏过程中的问题，为什么用斜面保存不用甘油种。斜面容易退化，保藏的培养基是否有加抗生素？可以拿高浓度抗生素的培养基重新筛选试试。
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3楼2013-12-13 16:36:53
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-13 16:36:53
是保藏过程中的问题，为什么用斜面保存不用甘油种。斜面容易退化，保藏的培养基是否有加抗生素？可以拿高浓度抗生素的培养基重新筛选试试。

谢谢！斜面保藏主要是使用时方便，还有就是重组酵母是基因重组到染色体上的，应该很稳定，载体使用的是缺陷型筛选，不用添加抗生素的。
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自信加努力成就人生
4楼2013-12-16 13:27:55
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