应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用扩增cDNA的引物扩增基因组DNA
51/1返回列表
查看: 3550  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] 用扩增cDNA的引物扩增基因组DNA 已有7人参与

各位亲们，我之前用来扩增cDNA的引物用来扩增基因组DNA，刚开始的时候能得到一条目的条带，但之后几次，同样的条件下，不同的DNA样品，有的会出现一条目的条带，但有的除了目的条带外还会出现好多条条带，其中提取基因组DNA时没有加入RNA酶，将测得序列比对后，以cDNA为模板和以DNA为模板的序列比对结果相似性为99%，但现在我不知道是为什么会有的出现那么多条带，PCR条件都是一样的。各位大神帮帮忙吧~不胜感激
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-10 21:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-11 09:34:00
如果你的引物不跨内含子，用cDNA为模板与gDNA为模板p出来的序列理论上是完全相同的。出现多条带的原因可能是引物的特异性不强，与加不加RNA酶处理gDNA无关，因为DNA聚合酶是不能以RNA为模板的，RNA只有反转录成cDNA ...

引物不跨内含子意思是指引物在一个外显子里是吗？如果引物特异性不好，为什么刚开始做的时候都只是批出了一条目的条带，第二次做的时候出现好多条带的情况，这应该不是引物特异性不好的原因吧？还有就是之前用这条引物扩增cDNA也只是出现一条条带，如果引物特异性不好，那不是应该也会出现好多条带吗？麻烦帮我解答一下吧
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-11 15:23:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-11 09:58:23
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 19:32:51
如果你的引物不跨内含子，用cDNA为模板与gDNA为模板p出来的序列理论上是完全相同的。出现多条带的原因可能是引物的特异性不强，与加不加RNA酶处理gDNA无关，因为DNA聚合酶是不能以RNA为模板的，RNA只有反转录成cDNA才能做PCR。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-11 09:34:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongge2013

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 19:32:57
基因组的信息量比cDNA的信息量大的多，所以你的引物针对于基因组DNA特异性可能没那么好，你可以去UCSC网站分析下你的引物质量
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-11 15:39:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

竹子小小

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 19:33:05
你几次的扩增条件是一样的吗？第二次的模板或者引物浓度都一样吗。只要没有内含子，扩出来的都一样。基因组东西多，有杂带也正常
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-11 16:03:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302求调剂 +3 小贾同学123 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:39 by zhq0425
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 304求调剂 +6 小熊joy 2026-03-14 6/300 2026-03-16 12:59 by Iveryant
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭