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lwk5716铁杆木虫 (正式写手)
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关于荧光定量PCR引物设计的问题
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如题，我有一个疑问，就是我现在有一些转录组测序的序列，但是只是部分序列，还没有全长，但是我想QRT-PCR。设计引物时用测得的序列设计，但是总是没有完美的，有二聚体，有的有错配。扩出来效果不好，但是用primer5找不出好的，是不是我的序列只是部分的？还是这段序列没有符合荧光定量条件要求的引物位点？要是这样该怎么办啊？ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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4楼2013-11-29 21:40:47
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5楼2013-12-26 16:20:35
| 做荧光定量最好用web primer这是网址：http://www.yeastgenome.org/cgi-bin/web-primer。primer5有个缺点，不管怎么样都会出来引物，而web primer只有付合要求才能设计出引物，这样就要求自己选择合适的片段来设计引物，而这样设计出来的引物表现也是非常出色的~~另外不知道楼主的研究对象没有基因组信息，如果有建议进行外显子分区，然后将引物设计成跨外显子的。 |
6楼2014-06-04 17:01:26
lwk5716
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