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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒不稳定怎么办？
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574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 质粒不稳定怎么办？

载体手册上有这么句话“如果目的质粒不稳定，目的蛋白将很少表达甚至不表达，在这种情况下，来自 8％甘油冻存的菌液要进行104或更高倍数稀释培养并生长到适于表达的浓度。”这种情况该怎么做？没看明白。
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1楼 2013-11-19 16:18:06
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redleaf16

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-29 13:12:12
过夜培养的菌，取50uL 于 5mL 的液体培养基中摇菌培养，一般2个小时多一点，达到OD=0.6时，再加IPTG诱导
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为了艺术，为了生活，为了艺术生活
2楼2013-11-29 12:00:10
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
574759350: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-30 13:35:20
质粒在表达菌株里面比如BL21(DE3)是不稳定的，原因是BL21菌株没有RecA1和Endo A1的基因敲除，容易发生重组和降解

所以此公司手册上说的意思是，让你把你获得的8%的甘油菌做一个10^4的稀释接种，培养，也就是1:10000的接种，培养起来
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-11-29 14:07:08
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