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574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 质粒不稳定怎么办?

载体手册上有这么句话“如果目的质粒不稳定,目的蛋白将很少表达甚至不表达,在这种情况下,来自 8%甘油冻存的菌液要进行104或更高倍数稀释培养并生长到适于表达的浓度。”这种情况该怎么做?没看明白。
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redleaf16

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-29 13:12:12
过夜培养的菌,取50uL 于 5mL 的液体培养基中摇菌培养,一般2个小时多一点,达到OD=0.6时,再加IPTG诱导
为了艺术,为了生活,为了艺术生活
2楼2013-11-29 12:00:10
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
574759350: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-30 13:35:20
质粒在表达菌株里面比如BL21(DE3)是不稳定的,原因是BL21菌株没有RecA1和Endo A1的基因敲除,容易发生重组和降解

所以此公司手册上说的意思是,让你把你获得的8%的甘油菌做一个10^4的稀释接种,培养,也就是1:10000的接种,培养起来
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-11-29 14:07:08
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