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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选用不用考虑载体本身的抗性
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0108winfield

金虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选用不用考虑载体本身的抗性

做蓝白斑筛选时，载体用的是pkc1139,具有阿普抗性，做蓝白斑筛选是LB培养基用不用加阿普霉素？
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信念，就是即使看不到长阶通向何方，却仍愿意迈出第一步。
1楼 2013-11-15 13:34:03
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156348820

木虫 (小有名气)
楼主  我也在用pKC1139和ET12567敲除基因，我有个疑惑  能否帮个帮啊？

PKC1139转到DH2a或者ET12567后可以37度培养吗？？？还是只有到了结合转移才考虑温敏复制子啊？求解
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4楼2014-03-27 20:18:52
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

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得要用啊，
阿普霉素筛选菌，只有转入质粒的菌才能长

蓝白斑是筛选重组载体，两者的目的不一样

否则你的的板子会长成一片
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-15 16:24:57
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
其实我都不用蓝白斑筛选，只筛选载体的抗性
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3楼2013-11-15 19:23:58
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0108winfield

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 156348820 at 2014-03-27 20:18:52
楼主  我也在用pKC1139和ET12567敲除基因，我有个疑惑  能否帮个帮啊？

PKC1139转到DH2a或者ET12567后可以37度培养吗？？？还是只有到了结合转移才考虑温敏复制子啊？求解

DH2a或者ET12567不都是大肠杆菌吗？大肠杆菌的最适培养温度是37度，所以转化后是我们实验室一般37度培养，28度也试过，也长，但是不如37度效果好
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信念，就是即使看不到长阶通向何方，却仍愿意迈出第一步。
5楼2014-03-31 18:11:59
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