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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白溶液脱气的问题
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xipha

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白溶液脱气的问题

实验室需要把蛋白溶液脱气，因为害怕超声会影响活性，所以选用真空脱气
因为第一次使用真空脱气，实验室也没有真空脱气机，只有一个带气封仓的真空泵，求做过的给予指点。

首先是压力应该是多少？
我的做法是调节压力阀一直到蛋白溶液中有小气泡产生然后会慢慢变大浮起。大概在-28.5kpa。
但是-29kpa左右蛋白溶液就开始沸腾了，我怀疑上述气泡是因为蒸发？

然后就是一般脱气的时间需要多久？感觉越久溶液挥发得越多

最后，脱气后的体积减小了，各位是怎么处理的，直接把缓冲液加回去到原来的体积么？

多谢了！
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1楼 2013-11-13 02:21:19
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gaolei0529

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xipha: 金币+1, ★有帮助, 能不能说详细些 2013-11-14 00:12:46
可以用真空干燥器来脱气呀。
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2楼2013-11-13 15:12:13
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xipha: 金币+1, ★有帮助, 这个比较不彻底，实验室没有冻干设备。现在真空是可以用就是不知道具体的操作应该怎样 2013-11-14 00:12:08
要求不严格的话可以用0.45um的针式滤器过滤，这种方法能出去一部分的气体；还可以用冷冻干燥机来脱气
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爱拼才会赢
3楼2013-11-13 19:02:32
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-14 10:25:51
我觉得高速离心就可以，有什么气泡都可以离心掉。我们ITC有个专门脱气的装置，原理就是真空状态下离心。你不能真空，那就高速离心。
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4楼2013-11-13 21:46:08
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xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaolei0529 at 2013-11-13 15:12:13
可以用真空干燥器来脱气呀。

能不能具体说说你们实验室真空干燥器的参数，主要是真空度（压力）和时间？
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5楼2013-11-14 00:13:48
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-11-14 10:26:00
xipha: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-11-15 01:57:59
取决于你的试验目的，要求脱气到什么程度，以及蛋白的稳定程度
用ITC那种真空离心肯定是没问题的，但是如果你蛋白不稳定，很容易在真空条件下出现沉淀。而且一旦拿出来接触空气，空气中的氧气又会重新溶解。所以说取决于你要脱气严格到什么程度
另一方面你是目的是要完全真空还是就只要无氧条件？可不可以在氮气或者氩气中做试验，完全真空比无氧条件难度要大很多。在氮气或者氩气的手套箱里做试验难度要小一些
一般为了达到无氧条件，我的做法是找个圆底烧瓶，加入蛋白溶液，连到真空和氩气罐上。然后反复通真空，通氩气，通真空，通氩气,重复5-6次。每一次真空只维持4-5秒，时间一长蛋白容易沉淀
如果条件要求不是特别苛刻，我会把蛋白浓缩到很高浓度，然后用除气后的溶液在氮气手套箱里稀释高浓度的蛋白
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
6楼2013-11-14 01:59:12
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xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-11-14 01:59:12
取决于你的试验目的，要求脱气到什么程度，以及蛋白的稳定程度
用ITC那种真空离心肯定是没问题的，但是如果你蛋白不稳定，很容易在真空条件下出现沉淀。而且一旦拿出来接触空气，空气中的氧气又会重新溶解。所以说 ...

我的实验其实是测BSA蛋白在材料表面的吸附量，但是在过夜浸泡过程中蛋白溶液中溶解的气体析出了，在材料表面形成气泡影响定量。所以需要脱气。氩气的办法我可能没法用，但是觉得bsa还是很皮实的，不知道会不会如你说的变性。 另外我们实验室只有有连着真空泵的密封舱，没办法做真空离心。能不能给些建议？还有就是你们的真空度是多少压力？多长时间为好？ 多谢啦！
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7楼2013-11-15 02:05:40
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xipha: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-11-16 03:09:05
引用回帖:
7楼: Originally posted by xipha at 2013-11-15 02:05:40
我的实验其实是测BSA蛋白在材料表面的吸附量，但是在过夜浸泡过程中蛋白溶液中溶解的气体析出了，在材料表面形成气泡影响定量。所以需要脱气。氩气的办法我可能没法用，但是觉得bsa还是很皮实的，不知道会不会如你 ...

BSA那肯定是相当稳定了,所以不用担心蛋白稳定性
脱气过程需要的真空度似乎没什么特别要求,我用的真空泵最高能到0.18mbar,不过主要取决于我瓶子的密封性,有时候懒得在连接处抹凡士林就真空度差一些
脱气看到一直出泡是很正常的,不是沸腾,就是溶液中溶解的气体逐渐析出了
不知道你用的是BSA的冻干的干粉还是用的是溶液
我觉得你这试验不需要太严格脱气,那就干脆在溶解蛋白之前把溶液放在超声里连着真空抽一晚上.然后第二天用脱气后的溶液溶解BSA干粉或稀释极高浓度的BSA溶液,这样也不用担心活性和蛋白浓度改变了.
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
8楼2013-11-15 03:40:01
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