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蛋白溶液脱气的问题
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实验室需要把蛋白溶液脱气，因为害怕超声会影响活性，所以选用真空脱气 因为第一次使用真空脱气，实验室也没有真空脱气机，只有一个带气封仓的真空泵，求做过的给予指点。 首先是压力应该是多少？ 我的做法是调节压力阀一直到蛋白溶液中有小气泡产生然后会慢慢变大浮起。大概在-28.5kpa。 但是-29kpa左右蛋白溶液就开始沸腾了，我怀疑上述气泡是因为蒸发？ 然后就是一般脱气的时间需要多久？感觉越久溶液挥发得越多 最后，脱气后的体积减小了，各位是怎么处理的，直接把缓冲液加回去到原来的体积么？ 多谢了！ |
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取决于你的试验目的，要求脱气到什么程度，以及蛋白的稳定程度 用ITC那种真空离心肯定是没问题的，但是如果你蛋白不稳定，很容易在真空条件下出现沉淀。而且一旦拿出来接触空气，空气中的氧气又会重新溶解。所以说取决于你要脱气严格到什么程度 另一方面你是目的是要完全真空还是就只要无氧条件？可不可以在氮气或者氩气中做试验，完全真空比无氧条件难度要大很多。在氮气或者氩气的手套箱里做试验难度要小一些 一般为了达到无氧条件，我的做法是找个圆底烧瓶，加入蛋白溶液，连到真空和氩气罐上。然后反复通真空，通氩气，通真空，通氩气,重复5-6次。每一次真空只维持4-5秒，时间一长蛋白容易沉淀 如果条件要求不是特别苛刻，我会把蛋白浓缩到很高浓度，然后用除气后的溶液在氮气手套箱里稀释高浓度的蛋白 |
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BSA那肯定是相当稳定了,所以不用担心蛋白稳定性 脱气过程需要的真空度似乎没什么特别要求,我用的真空泵最高能到0.18mbar,不过主要取决于我瓶子的密封性,有时候懒得在连接处抹凡士林就真空度差一些 脱气看到一直出泡是很正常的,不是沸腾,就是溶液中溶解的气体逐渐析出了 不知道你用的是BSA的冻干的干粉还是用的是溶液 我觉得你这试验不需要太严格脱气,那就干脆在溶解蛋白之前把溶液放在超声里连着真空抽一晚上.然后第二天用脱气后的溶液溶解BSA干粉或稀释极高浓度的BSA溶液,这样也不用担心活性和蛋白浓度改变了. |
8楼2013-11-15 03:40:01
