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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 光谱分析 » 蛋白溶液荧光求助
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woody87040

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白溶液荧光求助

配置了4gm/ml 的BSA或是LYS的储备溶液，都是在4度冰箱保存的，做实验的时候取出这储备溶液20ul，稀释至4mlPBS中，测量荧光，为什么做的三组平行试验，荧光的信号强度差别很大，比如一个是800左右，一个是900左右，一个是700左右？？

而且这个配置好的溶液马上测量和过5小时以后测量，自身的荧光强度也会下降？是蛋白质不稳定的原因么？还是有什么别的原因？？很是费解啊~~~~

求大侠帮助。。。。感激不尽~~
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我不知将去何方，但我已在路上
1楼 2013-01-31 03:32:29
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songyuze0319

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
xbqewpq: 金币+1, 应助指数+1, 感谢应助，欢迎常来分析版交流~ 2013-02-01 17:16:11
woody87040: 金币+1, ★有帮助 2013-02-02 10:58:14
响应值是700—-900，似乎大了点，你可把浓度稀释到让响应值在低于500的情况下，做做稳定性，因为浓度太大，有可能会有猝灭现象发生。
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2楼2013-01-31 13:43:26
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woody87040

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by songyuze0319 at 2013-01-31 13:43:26
响应值是700—-900，似乎大了点，你可把浓度稀释到让响应值在低于500的情况下，做做稳定性，因为浓度太大，有可能会有猝灭现象发生。

我蛋白的浓度非常稀了已经，只有0.02mg/ml哎~~~是我这仪器的问题么？
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我不知将去何方，但我已在路上
3楼2013-02-01 04:54:20
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suiqingqing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测荧光溶液中是否加了别的物质，放置久了会降解之类的，影响结果呢？
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4楼2013-02-02 14:29:16
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songyuze0319

金虫 (正式写手)
紫外分光光度仪的常用浓度时ppm级，而荧光光光度仪的灵敏度是紫外分光光度仪的2~3倍，你稀释后的浓度时200ppm，实际上还是很大的，你要有时间的话不妨再稀释试试。但愿对你有帮助！
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5楼2013-02-02 14:42:40
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cutemm

金虫 (正式写手)
★
西湖醉鱼: 金币+1, 欢迎常来探讨问题 2013-02-02 23:32:54
这些都很正常，荧光比较灵敏，三个溶液任何一点有所不同，都会导致荧光信号差别大。只要做实验的时候，三个溶液的实验规律一致就可以了。

荧光是有寿命的，一般能维持2个小时左右不变的，然后慢慢就降低了，所以做实验时候，配好溶液要做一个荧光稳定性实验，确认在什么时间段内荧光一致保持一个比较稳定的数值。
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6楼2013-02-02 17:12:00
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shihuimin256

新虫 (初入文坛)
请问您知道哪里能买到荧光蛋白溶液吗？
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7楼2018-12-10 10:15:25
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