| 查看: 8073 | 回复: 22 | ||||||
[求助]
羧基荧光微球标记蛋白抗体 已有7人参与
|
||||||
|
求助：想将羧基化的荧光微球与蛋白抗体连接，最终使用BCA试剂盒检测仅一种抗体连接成功，其他均失败，问题可能出在哪里？ 实验步骤如下： 1.稀释荧光微球 2.加入EDC（终浓度2mM）和NHS（终浓度 5mM），室温反应15min 3.加入2-巯基乙醇（终浓度20mM） 4.离心去上清 5.加入抗体，室温反应4h 6.加入 Tris（终浓度50mM） 7. 离心去上清 8.复溶液复溶 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 | 纳米生物学 | 课题-荧光纳米材料 | 羧基活化EDC,NHS |
» 猜你喜欢
265求调剂
已经有6人回复
-
材料求调剂
已经有13人回复
-
一志愿郑州大学材料与化工085600，求调剂
已经有26人回复
-
070300化学279求调剂
已经有18人回复
-
材料调剂
已经有8人回复
-
化工求调剂！
已经有6人回复
-
290求调剂085701
已经有11人回复
-
085600材料与化工专硕329 求调剂
已经有6人回复
-
295求调剂
已经有15人回复
-
一志愿河北工业大学材料工程，初试344求专硕调剂
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 激光共聚焦显微镜对载体表面荧光标记蛋白质能定量吗？
已经有6人回复
- 磁珠和抗体怎样连接？怎样证明连接成功？
已经有6人回复
- 谷胱甘肽修饰的CdTe EDC NHS法连抗体连不上
已经有12人回复
- 量子点与抗体的偶联
已经有21人回复
- 【求助】羧基和氨基的反应能在什么比较温和的条件下进行
已经有13人回复
- 【请教】量子点与抗体连接后，用SDS电泳确定连接时，量子点无法进入分离胶。。。
已经有20人回复
- 【请教】叶酸标记量子点细胞成像
已经有30人回复
- 【求助/交流】请教一下，如果做通道蛋白的免疫荧光和WB选哪家的抗体最好
已经有5人回复
- 【求助/交流】最近购买的荧光标记的P糖蛋白抗体的使用问题
已经有9人回复
- 【求助】异硫氨酸荧光素标记纤维连接蛋白Fn方法
已经有4人回复
- 【求助/交流】有公司进行绿色荧光蛋白标记细菌的技术服务业务吗
已经有8人回复
- 【有奖活动】~~~秀出您的美图~~~
已经有28人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
| 如果荧光微球上有羧基，其与蛋白质的连接非常容易，就是蛋白质分子表面的Asn、Gin的侧链NH2,与荧光微球上的羧基在EDC的催化下形成酰胺键，反应起来很容易不用楼主那么麻烦。EDC活性很高，一般为防止蛋白质损失，只要将两者按一定比例放入烧杯，加上蒸馏水，放在0-4度的冷柜中，过夜即可。反应效果可以离心获得荧光微球沉淀，过滤或者吸走上清液，用红外傅里叶变换光谱分别检测荧光微球、游离的蛋白质和反应后的荧光微球，对比前两者的红外傅里叶变换光谱的叠加与反应后的荧光微球的红外傅里叶变换光谱，后者的红外傅里叶变换光谱与前两者的红外傅里叶变换光谱的并集应该多有重合。 |
10楼2014-08-24 18:25:00
|
http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ac303204q Approximately 5 mg of MNS or FNS were activated in 100 mM EDC and 100 mM NHS in l mL of 0.01 M PBS (pH 6.8) at room temperature with continuous shaking. After incubating for 30 min, MNS were separated by magnetic force, and FNS by centrifugation, and washed with 0.01 M PBS (pH 7.2) three times. Then, they were dispersed in 1 mL of 0.01 M pH 7.2 PBS to react with 2 mg of NH2−PEG−CM for about 4 h at room temperature with continuous shaking. Afterward, the resultant MNS−PEG−COOH and FNS−PEG−COOH were washed by 0.01 M PBS (pH 7.2) five times to remove any unreacted NH2−PEG−CM. Then, MNS−PEG−COOH and FNS−PEG−COOH were reacted with the antibodies to S. typhimurium (about 50 μg), and the conjugation procedure was similar to that above except that the NH2−PEG−CM were replaced by antibodies |
7楼2013-10-03 11:29:47
18楼2015-08-26 16:38:03
2楼2013-02-17 12:08:36
3楼2013-02-18 08:59:00
4楼2013-02-18 09:44:01
5楼2013-02-18 10:06:44
6楼2013-02-18 12:30:23
8楼2014-05-07 16:02:42
9楼2014-05-20 09:33:33
