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伊娃EVA

金虫 (职业作家)

[求助] 谷胱甘肽修饰的CdTe EDC NHS法连抗体连不上

想请教虫虫们  我现在在用谷胱甘肽修饰的CdTe与抗体连接 然后想进行荧光免疫分析 FLISA  有没有可行性啊？

现在主要是连都连不上 用EDC NHS的方法，然后透析  

比例为量子点：EDC：NHS:抗体=300:5:5:1  先是量子点和EDC NHS搅拌5min 然后加抗体 然后过夜搅拌 然后透析

就没有荧光了 总是连不上

我应该注意些什么 哪些是不对的啊
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羧基活化EDC,NHS

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1楼2011-07-06 09:56:27
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

weiwei_he

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huyihui2010 at 2011-12-17 10:30:44:
你好，请问你的问题解决了否？我最近也在做跟你一样的工作，请问这个透射电镜要怎么来分析交联结果的啊？还有其他方法可以来证明不啊？期待回复，感谢！

负染之后再看透射电镜，看量子点与蛋白的距离。
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nopains,nogains
6楼2011-12-18 08:45:43
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普通回帖

tommayer

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

伊娃EVA(金币+2): 谢谢回复~~~~~~~ 2011-07-06 11:04:55
这东西怕NHS的，一加进去马上荧光就没了，单独用EDC吧，但是偶联完之后荧光还是会淬灭很多。而且偶联产物也不好放，荧光会慢慢淬灭。和楼主同行。多交流，站内信！
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2楼2011-07-06 10:40:02
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whgcdxkj

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

伊娃EVA(金币+5): 多谢回帖~~~~~这么复杂啊 我要愁死了 做不出来 2011-07-08 08:06:18
就我了解，你的量子点与EDC、NHS的比例有误，应该是EDC、NHS比量子点的摩尔数大百倍以上。还有一点，虽然有人成功报道，但是我总认为，谷胱甘肽中的羧基和氨基之间会不会有影响，加剧量子点聚集。还有ph值也要注意。文献多报道加入抗体后，是不是应该在室温下在放置一段时间再置于4°下。
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天道酬勤；机会总是青睐有准备的人
3楼2011-07-07 20:14:37
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weiwei_he

金虫 (小有名气)
想请教虫虫们，我最近也在做EDC交联量子点和蛋白，羧基活化后量子点加入蛋白后，也产生沉淀，而且荧光也降低，是什么原因啊？负染后，透射电镜结果分析，基本没交联。
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nopains,nogains
4楼2011-09-26 15:19:56
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huyihui2010

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by weiwei_he at 2011-09-26 15:19:56:
想请教虫虫们，我最近也在做EDC交联量子点和蛋白，羧基活化后量子点加入蛋白后，也产生沉淀，而且荧光也降低，是什么原因啊？负染后，透射电镜结果分析，基本没交联。

你好，请问你的问题解决了否？我最近也在做跟你一样的工作，请问这个透射电镜要怎么来分析交联结果的啊？还有其他方法可以来证明不啊？期待回复，感谢！
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5楼2011-12-17 10:30:44
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huyihui2010

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by weiwei_he at 2011-12-18 08:45:43:
负染之后再看透射电镜，看量子点与蛋白的距离。

请问在整个交联过程中有哪些细节要注意啊，1mg/ml的量子点，5mM sulf-NHS和10mM的EDC在37°下活化1h后，再加蛋白质（链霉亲和素），继续在37°下摇床反应2h，不知道为什么就是交联不上去啊。求解，感谢！
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7楼2011-12-18 10:32:20
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weiwei_he

金虫 (小有名气)
我是在常温下反应24h，EDC和NHS加的摩尔数等量，与量子点是5000:1的摩尔比。
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nopains,nogains
8楼2011-12-18 20:22:59
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huyihui2010

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by weiwei_he at 2011-12-18 20:22:59:
我是在常温下反应24h，EDC和NHS加的摩尔数等量，与量子点是5000:1的摩尔比。

非常感谢！呵呵...我试试，有问题再来请教你哦！可以加下你QQ不啊？
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9楼2011-12-18 21:19:25
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royhahaha

木虫 (小有名气)
感觉抗体加的有点少.
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10楼2012-02-17 11:03:49
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