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伊娃EVA

金虫 (职业作家)

[求助] 谷胱甘肽修饰的CdTe EDC NHS法连抗体连不上

想请教虫虫们  我现在在用谷胱甘肽修饰的CdTe与抗体连接 然后想进行荧光免疫分析 FLISA  有没有可行性啊?

现在主要是连都连不上 用EDC NHS的方法,然后透析  

比例为量子点:EDC:NHS:抗体=300:5:5:1  先是量子点和EDC NHS搅拌5min 然后加抗体 然后过夜搅拌 然后透析

就没有荧光了 总是连不上

我应该注意些什么 哪些是不对的啊
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羧基活化EDC,NHS

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weiwei_he

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by huyihui2010 at 2011-12-17 10:30:44:
你好,请问你的问题解决了否?我最近也在做跟你一样的工作,请问这个透射电镜要怎么来分析交联结果的啊?还有其他方法可以来证明不啊?期待回复,感谢!

负染之后再看透射电镜,看量子点与蛋白的距离。
nopains,nogains
6楼2011-12-18 08:45:43
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普通回帖

tommayer

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

伊娃EVA(金币+2): 谢谢回复~~~~~~~ 2011-07-06 11:04:55
这东西怕NHS的,一加进去马上荧光就没了,单独用EDC吧,但是偶联完之后荧光还是会淬灭很多。而且偶联产物也不好放,荧光会慢慢淬灭。和楼主同行。多交流,站内信!
2楼2011-07-06 10:40:02
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whgcdxkj

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

伊娃EVA(金币+5): 多谢回帖~~~~~这么复杂啊 我要愁死了 做不出来 2011-07-08 08:06:18
就我了解,你的量子点与EDC、NHS的比例有误,应该是EDC、NHS比量子点的摩尔数大百倍以上。还有一点,虽然有人成功报道,但是我总认为,谷胱甘肽中的羧基和氨基之间会不会有影响,加剧量子点聚集。还有ph值也要注意。文献多报道加入抗体后,是不是应该在室温下在放置一段时间再置于4°下。
天道酬勤;机会总是青睐有准备的人
3楼2011-07-07 20:14:37
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weiwei_he

金虫 (小有名气)

想请教虫虫们,我最近也在做EDC交联量子点和蛋白,羧基活化后量子点加入蛋白后,也产生沉淀,而且荧光也降低,是什么原因啊?负染后,透射电镜结果分析,基本没交联。
nopains,nogains
4楼2011-09-26 15:19:56
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huyihui2010

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by weiwei_he at 2011-09-26 15:19:56:
想请教虫虫们,我最近也在做EDC交联量子点和蛋白,羧基活化后量子点加入蛋白后,也产生沉淀,而且荧光也降低,是什么原因啊?负染后,透射电镜结果分析,基本没交联。

你好,请问你的问题解决了否?我最近也在做跟你一样的工作,请问这个透射电镜要怎么来分析交联结果的啊?还有其他方法可以来证明不啊?期待回复,感谢!
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5楼2011-12-17 10:30:44
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huyihui2010

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by weiwei_he at 2011-12-18 08:45:43:
负染之后再看透射电镜,看量子点与蛋白的距离。

请问在整个交联过程中有哪些细节要注意啊,1mg/ml的量子点,5mM sulf-NHS和10mM的EDC在37°下活化1h后,再加蛋白质(链霉亲和素),继续在37°下摇床反应2h,不知道为什么就是交联不上去啊。求解,感谢!
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7楼2011-12-18 10:32:20
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weiwei_he

金虫 (小有名气)

我是在常温下反应24h,EDC和NHS加的摩尔数等量,与量子点是5000:1的摩尔比。
nopains,nogains
8楼2011-12-18 20:22:59
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huyihui2010

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by weiwei_he at 2011-12-18 20:22:59:
我是在常温下反应24h,EDC和NHS加的摩尔数等量,与量子点是5000:1的摩尔比。

非常感谢!呵呵...我试试,有问题再来请教你哦!可以加下你QQ不啊?
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9楼2011-12-18 21:19:25
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royhahaha

木虫 (小有名气)

感觉抗体加的有点少.
10楼2012-02-17 11:03:49
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