24小时热门版块排行榜    

查看: 7819  |  回复: 22
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ywhcsy

铜虫 (初入文坛)

[求助] 羧基荧光微球标记蛋白抗体 已有7人参与

求助:想将羧基化的荧光微球与蛋白抗体连接,最终使用BCA试剂盒检测仅一种抗体连接成功,其他均失败,问题可能出在哪里?
实验步骤如下:
1.稀释荧光微球
2.加入EDC(终浓度2mM)和NHS(终浓度 5mM),室温反应15min
3.加入2-巯基乙醇(终浓度20mM)
4.离心去上清
5.加入抗体,室温反应4h
6.加入 Tris(终浓度50mM)
7. 离心去上清
8.复溶液复溶
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验 纳米生物学 课题-荧光纳米材料 羧基活化EDC,NHS

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

do what you think is right
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

悠悠落叶

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ywhcsy at 2013-02-18 10:06:44
微球是液态的  有缓冲液
我一般是用缓冲液溶解EDC、NHS到高浓度母液   然后加入少量母液到终浓度
我的缓冲液是水溶液的会不会造成EDC淬灭?...

会这类缩合试剂一遇到水就不行了
索马鲁肽,利拉鲁肽,德谷胰岛素,InsulinIcodec胰岛素侧链,发酵索玛/利拉直链热卖
6楼2013-02-18 12:30:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
问题1:荧光微球的粒径多大?
2:为什么要加2-巯基乙醇?
我做过羧基微球直接与抗体偶联的试验,直接用EDC,偶联效率在95%以上。
2楼2013-02-17 12:08:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ywhcsy

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-17 12:08:36
问题1:荧光微球的粒径多大?
2:为什么要加2-巯基乙醇?
我做过羧基微球直接与抗体偶联的试验,直接用EDC,偶联效率在95%以上。

荧光微球粒径210nm
加入巯基乙醇是为了淬灭EDC
曾经试过直接使用EDC耦联    荧光微球聚集
不知能否将一步偶联的步骤发给我再试试
另使用BCA试剂盒评价耦联效率是否可行
do what you think is right
3楼2013-02-18 08:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

悠悠落叶

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先把微球和NHS放在一起加溶剂,溶解NHS,然后在冰浴下缓慢滴加EDC,可以把EDC先溶解稀释缓慢滴加,然后在慢慢回温,其实加水就可以淬灭EDC了,不需要加巯基乙醇,多臭啊
加入抗体后多反应一点时间,反应个过夜或者8h再试试吧
索马鲁肽,利拉鲁肽,德谷胰岛素,InsulinIcodec胰岛素侧链,发酵索玛/利拉直链热卖
4楼2013-02-18 09:44:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见