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喵汪

银虫 (小有名气)

[交流] 磁珠和抗体怎样连接？怎样证明连接成功？

最近在做磁珠连抗体的实验，遇到好多问题。我们买来的是链霉亲和素修饰的磁珠，把抗体和生物素反应后，超滤离心，然后和磁珠反应。接下来的实验中磁珠贴壁现象非常严重，不知道是为什么呢？各位都用什么方法进行连接呢，我们也买了氨基和羧基修饰的磁珠。最好能说具体些，比如浓度啊比例啊。
还有非常想知道的一点，怎样证明磁珠和抗体连接成功呢？
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1楼 2012-01-08 01:40:45
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huquan0_0

捐助贵宾 (正式写手)
★ ★
喵汪(金币+1):谢谢参与
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2012-01-08 10:17:36
我没做过这个，只是有点了解。  

你磁珠没和生物素标记的抗体连接的时候，会不会也会发生贴壁的现象了。如果发生了，那就和生物素标记的抗体没关系。磁珠的问题，或者反应容器表面有什么东西的问题

如果是和生物素标记的抗体反应后才出现你说的现象，你考虑下生物素是不是标记多了，一般一个抗体上需要连接的生物素在3到4个左右，具体的你可以找网上找到一些资料，不易过多，也不宜过少。

要证明抗体和磁珠连接成功，你需要先荧光标记抗体，结合上抗体的磁珠会有荧光，不然就没有。
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2楼2012-01-08 08:41:33
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喵汪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huquan0_0 at 2012-01-08 08:41:33:
我没做过这个，只是有点了解。  

你磁珠没和生物素标记的抗体连接的时候，会不会也会发生贴壁的现象了。如果发生了，那就和生物素标记的抗体没关系。磁珠的问题，或者反应容器表面有什么东西的问题

如果是和 ...

谢谢楼上这么耐心的回复。磁珠没和抗体连接的时候是否发生贴壁现象，这个我还没做。我们的磁珠是从天津大学的一家公司买的，不知道是不是磁珠本身的问题。
抗体和生物素的比例约为1：30，这个是按说明书做的。
磁珠上标记的是生物素化一抗，反应完后我加入了染料标记的二抗，是能检测到荧光的，但是对照实验的荧光更强（就是直接让染料标记的二抗和磁珠孵育），所以有可能二抗是吸附到磁珠上去的，而不是基于和一抗的免疫反应。所以不足以证明生物素化一抗和磁珠连接成功，我这样推测没错吧？
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3楼2012-01-08 11:41:38
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lins79

铁杆木虫 (正式写手)
★
喵汪(金币+1):谢谢参与
别的我不知道，证明磁珠和抗体连接成功，这个我倒知道。1、跑电泳就行了，先跑个磁珠的，再跑个磁珠标抗体的，这俩的迁移时间差别很大。2、测磁珠的粒径，标记后磁珠的粒径会增大。
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4楼2012-01-09 09:35:42
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chaohu1127

银虫 (小有名气)
★ ★
喵汪(金币+1): 谢谢参与
红舟流星: 金币+1, 欢迎新虫来到生物功能材料板块交流 2012-10-13 14:06:26
问问楼上的都是哪个大学哪个导师的，国内做的好的有哪些人？
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5楼2012-10-13 10:36:03
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Jane-zhu

银虫 (小有名气)
★
喵汪(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by chaohu1127 at 2012-10-13 10:36:03
问问楼上的都是哪个大学哪个导师的，国内做的好的有哪些人？

同求
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7楼2013-05-14 16:10:43
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简单回复
strive1231236楼
2012-10-14 10:24  
喵汪(金币+1): 谢谢参与
红舟流星: 金币-1, 本版为专业版块，请勿纯表灌水 2012-10-14 14:13:25
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