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喵汪

银虫 (小有名气)


[交流] 磁珠和抗体怎样连接?怎样证明连接成功?

最近在做磁珠连抗体的实验,遇到好多问题。我们买来的是链霉亲和素修饰的磁珠,把抗体和生物素反应后,超滤离心,然后和磁珠反应。接下来的实验中磁珠贴壁现象非常严重,不知道是为什么呢?各位都用什么方法进行连接呢,我们也买了氨基和羧基修饰的磁珠。最好能说具体些,比如浓度啊比例啊。
还有非常想知道的一点,怎样证明磁珠和抗体连接成功呢?
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chaohu1127

银虫 (小有名气)


★ ★
喵汪(金币+1): 谢谢参与
红舟流星: 金币+1, 欢迎新虫来到生物功能材料板块交流 2012-10-13 14:06:26
问问楼上的都是哪个大学哪个导师的,国内做的好的有哪些人?
5楼2012-10-13 10:36:03
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huquan0_0

捐助贵宾 (正式写手)


★ ★
喵汪(金币+1):谢谢参与
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2012-01-08 10:17:36
我没做过这个,只是有点了解。  

你磁珠没和生物素标记的抗体连接的时候,会不会也会发生贴壁的现象了。如果发生了,那就和生物素标记的抗体没关系。磁珠的问题,或者反应容器表面有什么东西的问题

如果是和生物素标记的抗体反应后才出现你说的现象,你考虑下生物素是不是标记多了,一般一个抗体上需要连接的生物素在3到4个左右,具体的你可以找网上找到一些资料,不易过多,也不宜过少。

要证明抗体和磁珠连接成功,你需要先荧光标记抗体,结合上抗体的磁珠会有荧光,不然就没有。
2楼2012-01-08 08:41:33
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喵汪

银虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by huquan0_0 at 2012-01-08 08:41:33:
我没做过这个,只是有点了解。  

你磁珠没和生物素标记的抗体连接的时候,会不会也会发生贴壁的现象了。如果发生了,那就和生物素标记的抗体没关系。磁珠的问题,或者反应容器表面有什么东西的问题

如果是和 ...

谢谢楼上这么耐心的回复。磁珠没和抗体连接的时候是否发生贴壁现象,这个我还没做。我们的磁珠是从天津大学的一家公司买的,不知道是不是磁珠本身的问题。
抗体和生物素的比例约为1:30,这个是按说明书做的。
磁珠上标记的是生物素化一抗,反应完后我加入了染料标记的二抗,是能检测到荧光的,但是对照实验的荧光更强(就是直接让染料标记的二抗和磁珠孵育),所以有可能二抗是吸附到磁珠上去的,而不是基于和一抗的免疫反应。所以不足以证明生物素化一抗和磁珠连接成功,我这样推测没错吧?
3楼2012-01-08 11:41:38
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lins79

铁杆木虫 (正式写手)



喵汪(金币+1):谢谢参与
别的我不知道,证明磁珠和抗体连接成功,这个我倒知道。1、跑电泳就行了,先跑个磁珠的,再跑个磁珠标抗体的,这俩的迁移时间差别很大。2、测磁珠的粒径,标记后磁珠的粒径会增大。
4楼2012-01-09 09:35:42
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