24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xipha

木虫 (正式写手)

应助: 41 (小学生)
金币: 4332.1
红花: 12
帖子: 881
在线: 160.1小时
虫号: 447837
注册: 2007-11-01
专业: 生物化学

[求助] 蛋白溶液脱气的问题

实验室需要把蛋白溶液脱气，因为害怕超声会影响活性，所以选用真空脱气
因为第一次使用真空脱气，实验室也没有真空脱气机，只有一个带气封仓的真空泵，求做过的给予指点。

首先是压力应该是多少？
我的做法是调节压力阀一直到蛋白溶液中有小气泡产生然后会慢慢变大浮起。大概在-28.5kpa。
但是-29kpa左右蛋白溶液就开始沸腾了，我怀疑上述气泡是因为蒸发？

然后就是一般脱气的时间需要多久？感觉越久溶液挥发得越多

最后，脱气后的体积减小了，各位是怎么处理的，直接把缓冲液加回去到原来的体积么？

多谢了！

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

His-tag蛋白纯化柱子洗脱液中除去咪唑的办法已经有8人回复
菜籽蛋白提取液扫描已经有15人回复
纯化蛋白时关于溶液中咪唑的问题已经有7人回复
蛋白溶液荧光求助已经有6人回复
用磷酸盐缓冲液溶解的蛋白质可以用来跑SDS电泳吗已经有3人回复
3.5%变性聚丙烯酰胺凝胶已经有14人回复
含有咪唑的蛋白溶液用什么方法定量已经有9人回复
蛋白酶解液有臭鸡蛋味已经有17人回复
配制SDS溶液时需脱气吗已经有6人回复
用Sephadex G-100 上柱，上好后洗脱液流不出来，怎么办？？？已经有8人回复
干粉蛋白酶K，溶菌酶，RNA酶分别用什么溶液溶解已经有5人回复
水相中suzuki反应水溶液怎么除氧脱气？已经有17人回复
蛋白电泳液问题已经有12人回复
有谁使用碧云天的蛋白裂解液提取核蛋白？已经有3人回复
多糖液木瓜蛋白酶脱蛋白已经有4人回复
PBS溶液怎么除氧已经有7人回复
蛋白溶液粘度太大，怎么解决？已经有7人回复
磷酸盐缓冲液的浓度对蛋白的影响已经有14人回复
【求助/交流】蛋白溶液浓缩已经有32人回复
【求助】蛋白质溶液为什么要溶解在盐中？已经有5人回复
2%酪蛋白溶液已经有15人回复

1楼 2013-11-13 02:21:19

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

应助: 397 (硕士)
贵宾: 0.015
金币: 7568.2
散金: 493
红花: 60
沙发: 2
帖子: 1312
在线: 1350.9小时
虫号: 544795
注册: 2008-04-13
性别: GG
专业: 生物化学
管辖: 生物科学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-11-14 10:26:00
xipha: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-11-15 01:57:59

取决于你的试验目的，要求脱气到什么程度，以及蛋白的稳定程度
用ITC那种真空离心肯定是没问题的，但是如果你蛋白不稳定，很容易在真空条件下出现沉淀。而且一旦拿出来接触空气，空气中的氧气又会重新溶解。所以说取决于你要脱气严格到什么程度
另一方面你是目的是要完全真空还是就只要无氧条件？可不可以在氮气或者氩气中做试验，完全真空比无氧条件难度要大很多。在氮气或者氩气的手套箱里做试验难度要小一些
一般为了达到无氧条件，我的做法是找个圆底烧瓶，加入蛋白溶液，连到真空和氩气罐上。然后反复通真空，通氩气，通真空，通氩气,重复5-6次。每一次真空只维持4-5秒，时间一长蛋白容易沉淀
如果条件要求不是特别苛刻，我会把蛋白浓缩到很高浓度，然后用除气后的溶液在氮气手套箱里稀释高浓度的蛋白