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xipha

木虫 (正式写手)

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[求助] 蛋白溶液脱气的问题

实验室需要把蛋白溶液脱气，因为害怕超声会影响活性，所以选用真空脱气
因为第一次使用真空脱气，实验室也没有真空脱气机，只有一个带气封仓的真空泵，求做过的给予指点。

首先是压力应该是多少？
我的做法是调节压力阀一直到蛋白溶液中有小气泡产生然后会慢慢变大浮起。大概在-28.5kpa。
但是-29kpa左右蛋白溶液就开始沸腾了，我怀疑上述气泡是因为蒸发？

然后就是一般脱气的时间需要多久？感觉越久溶液挥发得越多

最后，脱气后的体积减小了，各位是怎么处理的，直接把缓冲液加回去到原来的体积么？

多谢了！

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1楼 2013-11-13 02:21:19

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xipha

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引用回帖:

6楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-11-14 01:59:12
取决于你的试验目的，要求脱气到什么程度，以及蛋白的稳定程度
用ITC那种真空离心肯定是没问题的，但是如果你蛋白不稳定，很容易在真空条件下出现沉淀。而且一旦拿出来接触空气，空气中的氧气又会重新溶解。所以说 ...

我的实验其实是测BSA蛋白在材料表面的吸附量，但是在过夜浸泡过程中蛋白溶液中溶解的气体析出了，在材料表面形成气泡影响定量。所以需要脱气。氩气的办法我可能没法用，但是觉得bsa还是很皮实的，不知道会不会如你说的变性。另外我们实验室只有有连着真空泵的密封舱，没办法做真空离心。能不能给些建议？还有就是你们的真空度是多少压力？多长时间为好？多谢啦！