应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求去掉环状质粒中酶切位点和切后的质粒连接问题？
51/1返回列表
查看: 2098  |  回复: 7
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

梦涵angle

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求去掉环状质粒中酶切位点和切后的质粒连接问题？

我想切掉质粒上salI 与HindIII之间的一个酶切位点，选这两种酶作为酶切点，切完后具体如何使用T4聚合酶或者Klenow Fragment使末端平滑化？如何再使切好的质粒再连成环状？ 第一次发帖，有点激动，可能说的不是很明白，求解！谢谢各位啊！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-11-08 18:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦涵angle

铁虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by yelangfh713 at 2013-11-08 22:25:03
应该还要看你用哪个公司的酶来选择失活温度吧。一般TOYOBO的HindIII需要在90度5分钟才能使酶的残余活性为0.还有双切的时候如果不是用诸如Fermentas公司的fast digest buffer的话，对于HindIII，我的经验是最好酶切时 ...

谢谢！我的目的基因连在另外的地方！
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-09 09:21:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
梦涵angle: 金币+10, ★★★很有帮助, 非常感谢 2013-11-08 19:41:19
将你的质粒用SalI和HindIII这两个酶进行双酶切2-4小时，然后65度热失活下这两个酶，往体系里面加1ul 2mM 的dNTP和T4 DNA polymerase，室温30min，胶回收再T4连接酶连接，转化
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-08 19:28:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦涵angle

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-08 19:28:48
将你的质粒用SalI和HindIII这两个酶进行双酶切2-4小时，然后65度热失活下这两个酶，往体系里面加1ul 2mM 的dNTP和T4 DNA polymerase，室温30min，胶回收再T4连接酶连接，转化

请问一下，双切2-4h能切开吗
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-08 19:42:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaping1988

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 梦涵angle at 2013-11-08 19:42:48
请问一下，双切2-4h能切开吗...

你就切4h保险一些吧
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-08 20:05:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭