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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE 180kD跑胶
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linxia2009

金虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE 180kD跑胶

想要的蛋白在180kD，用5%浓缩胶，8%分离胶（也用过7%），跑浓缩胶80v，分离胶120V。染色后，170kD以下的条带都很清晰，170kD以上到点样孔的位置没有出现明显的条带，是一团蓝色，像没跑开的样子。后来我又做了一遍，故意多跑了一会儿，聚集成团的蓝色被拉长了，但是不是条带，是锯齿状的杂乱的，甚至有竖着的。
这个实验是前段时间做的，今天图片没找到，找到后补上。
请问这是什么问题，是样品没有制好，还是跑胶电泳条件不对？
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1楼 2013-11-07 22:11:47
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haodanfeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
linxia2009: 金币+3 2013-11-18 20:48:46
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2013-11-18 23:14:17
1、增加样品煮样时间
2、建议使用4%的浓缩胶，8%的分离胶试试
3、建议蛋白条带进入分离胶后，用180V的电压跑
4、配胶时，延长凝固时间
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4楼2013-11-18 16:30:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-08 08:24:07
linxia2009: 金币+3 2013-11-10 18:54:15
延长变性时间，增加变性时SDS浓度。如果是膜蛋白，最好不要煮。
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2楼2013-11-08 01:41:01
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
linxia2009: 金币+1 2013-11-18 20:48:40
难道是传说中的鬼带
变性不够充分或者样品溶解性不好
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3楼2013-11-11 15:47:29
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doglet

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流经验！ 2013-11-18 23:14:37
linxia2009: 金币+3 2013-11-19 10:03:13
用6%的分离胶试一试，我的膜蛋白都在170kD以上，将溴酚蓝走出去，marker的70kd左右在胶的最下面，我最大的340kd的蛋白可以在胶的最上面出现。浓缩胶是5%的，都是按分子克隆第二版配的液体，其他的行胶条件，煮样条件等等和行小蛋白没区别。
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5楼2013-11-18 21:01:17
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