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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 测序结果中不到引物

各位高手,我最近在扩一个基因的全长序列,我现在根据这个基因的全长编码序列,跨编码序列的起始密码子和终止密码子设计了一对引物,预计片段长度大约1200bp,PCR之后电泳检测也是1200bp,可是为啥我在测序结果中找不到我的引物序列呢?我是PCR产物直接测得序。难道是没扩有扩到全长吗?
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每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
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yaping1988

新虫 (初入文坛)

连接载体应该可以测到全长的,可以用载体提供的测序引物
4楼2013-10-29 10:59:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-29 01:04:29
崔永霞: 金币+2, ★有帮助, 谢谢! 2013-10-29 08:39:41
测序结果在靠近引物区域的分辨率很差,一般是在测序引物后面二十个碱基开始有较好的结果。
2楼2013-10-29 00:49:17
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-29 00:49:17
测序结果在靠近引物区域的分辨率很差,一般是在测序引物后面二十个碱基开始有较好的结果。

那有什么方法可以确定这没有测出来的20几个碱基吗?连载体后测序可以吗?
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
3楼2013-10-29 08:39:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-10-29 08:39:22
那有什么方法可以确定这没有测出来的20几个碱基吗?连载体后测序可以吗?...

可以的。载体上的通用引物通常位于插入位点上下游几十个碱基处,一般没有问题。实在不行可以自己另行设计引物,保证测到全长序列。
5楼2013-10-30 03:38:45
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