24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 970  |  回复: 4

yangyan_cwnu

新虫 (初入文坛)

[交流] 如何设计一个PCR体系 已有3人参与

求助,如何设计一个PCR体系?
我现在扩增ACC1基因,大概1500kb,采用2*mix扩增,但扩增效果始终不好,无法进行下游实验,请高手指点。谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangyan_cwnu

新虫 (初入文坛)

补充:扩增程序:预变性:4min,94度。35个循环:变性,30s,94度;变性:30s,56度;退火:30s,56度;延伸:4min,68度。然后,68度,延伸15min。
现用扩增程序:2*mix:10微升。DDW:6微升。P1:1微升。P2:1微升。DNA:2微升。
效果不理想,求助各位大侠,各位高手。谢谢了!
2楼2013-10-22 09:52:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nwsuafliu

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物终浓度控制在0.2-0.5 uM
模板DNA最好能测一下浓度,控制在100 ng之内
延伸温度可用72度
最好能设梯度,找最佳退火温度。
知识改变命运
3楼2013-10-23 23:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwzjlq

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的片段大小是不是太长了?

[ 发自小木虫客户端 ]
向阳生长……
4楼2013-10-24 12:57:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangyan_cwnu at 2013-10-22 09:52:30
补充:扩增程序:预变性:4min,94度。35个循环:变性,30s,94度;变性:30s,56度;退火:30s,56度;延伸:4min,68度。然后,68度,延伸15min。
现用扩增程序:2*mix:10微升。DDW:6微升。P1:1微升。P2:1微 ...

延伸没必要4min,mix里面的taq酶起码1Min能延伸1KB。延伸温度的话taq酶是72度,KOD酶才是68度。楼主再具体说下扩增效果不好是怎么不好?最好把PCR产物跑胶的图片发上来看看
5楼2013-10-24 22:09:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangyan_cwnu 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +21 hualkop 2026-04-12 23/1150 2026-04-15 22:02 by hualkop
[考研] 求调剂 +11 小聂爱学习 2026-04-11 15/750 2026-04-15 21:57 by noqvsozv
[考研] 药学305求调剂 +10 玛卡巴卡boom 2026-04-10 10/500 2026-04-14 15:55 by zs92450
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 本科西工大 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-13 23:08 by pies112
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 一志愿华工085600 331分 +7 天下ww 2026-04-09 7/350 2026-04-13 09:01 by lhj2009
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +7 Ytyt11 2026-04-09 8/400 2026-04-12 16:57 by ajpv风雷
[考研] 296求调剂 +14 汪!?! 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 一志愿华中农微生物,288分,三年实验经历 +11 代fish 2026-04-09 11/550 2026-04-12 10:21 by Hayaay
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 求调剂,一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 求调剂 +6 archer.. 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:55 by zhq0425
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸,感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 085800 能源动力求调剂 +6 阿biu啊啊啊啊啊 2026-04-10 6/300 2026-04-10 15:03 by hemengdong
[考研] 一志愿沪9,326生物学求相关专业调剂 +4 刘墨墨 2026-04-09 4/200 2026-04-10 12:07 by pengliang8036
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 初试分332,一志愿报考西北工业大学, +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
信息提示
请填处理意见