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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 那个蛋白怎么跑成这样了？
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Netherland

金虫 (小有名气)

[求助] 那个蛋白怎么跑成这样了？

哪位大神帮忙分析一下，右下角那个蛋白怎么跑成那样了，跑了两次了都这样
那个蛋白怎么跑成这样了？
DSC07535.JPG
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1楼 2013-10-07 12:10:55
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回帖置顶 ( 共有1个 )

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 应助指数+1, 鼓励交流 2013-10-07 21:43:57
amisking: 回帖置顶 2013-10-08 18:11:38
楼主的电泳问题是SDS电泳带弥散、拖尾和变宽（SDS电泳带与邻近蛋白质电泳相连），原因和解决方法如下（我今天下午刚写好的材料）：

SDS电泳带弥散和拖尾的原因和改进措施(2013-10-7)

1.原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15µL（即2-10µg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100µL。
2.原因二：样品溶解不完全。
对策：
（1）样品应该充分溶解：保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。
(2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液；如果是自行配置标准和未知样品，按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后，将其转移至Eppendorf管，盖上盖子（可以在盖子处加上卡子）后在110度沸水中水浴加热3分钟（可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞，Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止，把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中，薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面，便于取用和加热，也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中，盖子可能会被冲开），而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用，则将样品放入零下20度冰箱中储存，需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样，以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。
（3）改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解，SDS 用量要充分。

SDS电泳带变宽的原因和改进措施(2013-10-7)
除了以上两条原因外，还有：
原因三：SDS电泳带变宽，SDS电泳带与邻近蛋白质电泳相连。除了上样量过多和样品溶解不完全外，凝胶的加样孔泄露会使得电泳带变宽。加样孔泄露往往由于凝胶与玻璃板之间产生裂纹引起。对策：此时只能重新制备凝胶，梳子拔起时要小心等凝胶凝聚完毕，速度不宜过快，拔起的方向要垂直于凝胶表面；要避免凝胶两侧的玻璃板与凝胶之间产生裂纹，在凝胶制备过程中不要挤压凝胶两侧的玻璃板。
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4楼2013-10-07 16:22:24
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Netherland(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-08 12:16:30
可能是上样量太大。
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2楼2013-10-07 12:53:18
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crastal_boy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-08 12:16:40
浓度太大了，稀释下再跑。
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3楼2013-10-07 12:56:19
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蓝冰天山

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-08 12:16:51
上样量太大，减少上样量试试，如果是沉淀的话，是不是没有离心？

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2013-10-07 19:12:28
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xiaoguoyk

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-08 12:17:01
个人认为 有可能是你的凝胶在做的时候不均匀，导致每个条不一样大小
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哒哒哒哒哒哒哒哒哒，哒哒哒哒哒哒哒哒，哒哒哒哒哒哒哒哒哒哒哒哒哒哒哒
6楼2013-10-07 19:21:26
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Netherland

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-07 12:53:18
可能是上样量太大。

可是上面部分条带显示浓度较低啊
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7楼2013-10-07 19:53:08
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Netherland

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by crastal_boy at 2013-10-07 12:56:19
浓度太大了，稀释下再跑。

上面条带不大清晰  应该浓度不高的
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8楼2013-10-07 19:53:43
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Netherland

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-10-07 16:22:24
楼主的电泳问题是SDS电泳带弥散、拖尾和变宽（SDS电泳带与邻近蛋白质电泳相连），原因和解决方法如下（我今天下午刚写好的材料）：

SDS电泳带弥散和拖尾的原因和改进措施(2013-10-7)

1.原因一：上样量过多，应 ...

跑了两次  胶也是重新做的  还是跑成这样  点样前都会沸水加热3分钟的
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9楼2013-10-07 19:55:46
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Netherland

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaoguoyk at 2013-10-07 19:21:26
个人认为 有可能是你的凝胶在做的时候不均匀，导致每个条不一样大小

做了两次  胶也是重新做的  仍然这样的
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10楼2013-10-07 19:56:07
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