应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 那个蛋白怎么跑成这样了？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
202/2返回列表上一页12
查看: 2054  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Netherland

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 蓝冰天山 at 2013-10-07 19:12:28
上样量太大，减少上样量试试，如果是沉淀的话，是不是没有离心？

跑得上清  上样量已经很低了20ul
赞一下 回复此楼
11楼2013-10-07 19:57:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝冰天山

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by Netherland at 2013-10-07 19:57:01
跑得上清  上样量已经很低了20ul...

20ul不算少了，我们最多也就20ul，上个10ul试试，或者跑个梯度看看是不是上样量的问题。看其他条带还好应该不是胶的问题

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
12楼2013-10-07 20:18:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by Netherland at 2013-10-07 19:55:46
跑了两次  胶也是重新做的  还是跑成这样  点样前都会沸水加热3分钟的...

1.样品应该充分溶解：保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。
2.SDS电泳带变宽，SDS电泳带与邻近蛋白质电泳相连。除了上样量过多和样品溶解不完全外，凝胶的加样孔泄露会使得电泳带变宽。加样孔泄露往往由于凝胶与玻璃板之间产生裂纹引起。对策：此时只能重新制备凝胶，梳子拔起时要小心等凝胶凝聚完毕，速度不宜过快，拔起的方向要垂直于凝胶表面；要避免凝胶两侧的玻璃板与凝胶之间产生裂纹，在凝胶制备过程中不要挤压凝胶两侧的玻璃板。
-----------这两条你并没有改进...这和你跑电泳的次数无关。

更正4楼：沸水浴是100度，不是110度。
赞一下 回复此楼
13楼2013-10-07 21:16:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这是15%以上浓度的胶跑诱导表达15kDa左右的蛋白吧?
我觉得这太正常不过了~~~~我跑小于15kDa的蛋白从来都是这鬼样子
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
14楼2013-10-07 21:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by Netherland at 2013-10-07 19:53:08
可是上面部分条带显示浓度较低啊...

即使上面的条带浓度低，如果下面的浓度过高也会造成这种现象。这也是为什么经纯化的蛋白的上样量要比粗提少很多的原因。
赞一下 回复此楼
15楼2013-10-07 23:05:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品蛋白浓度过高，甚至出现不溶的蛋白颗粒，建议上样前加热后离心，同时稀释样品
赞一下 回复此楼
自主创业者，捣腾生物试剂
16楼2013-10-08 15:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RUI1990

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白量过大就会出现上面的情况，将其稀释一下再试试。
赞一下 回复此楼
做自己
17楼2013-10-08 15:14:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ndsc

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
包涵体？样品浓度？还是标准品上太多了？！
赞一下 回复此楼
18楼2013-10-08 17:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

剑客心语

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是上样量过大的原因，将样品稀释一下试试，我一般上样5~10ul。
赞一下 回复此楼
一柄驻剑，一朝旅人，一颗常心，一生志言……行疆漫漫，品味一生……
19楼2013-10-12 16:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allen206

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白溶解buffer是什么？目标浓度多少？不要煮沸试一下，换成tricine page try try
赞一下 回复此楼
不想说什么，，，，
20楼2013-10-12 16:46:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Netherland 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料考研求调剂总分280 +12 mkjlz1 2026-04-06 14/700 2026-04-06 22:48 by mkjlz1
[考研] 调剂 +3 mcbbc 2026-04-06 4/200 2026-04-06 20:58 by lbsjt
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +10 cs0106 2026-04-05 12/600 2026-04-06 19:41 by 无际的草原
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
[考研] 求调剂 +5 chenxrlkx 2026-04-05 7/350 2026-04-06 07:54 by houyaoxu
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:07 by 啵啵啵0119
[考研] 求生物学学硕调剂——364分 +7 云朵遛弯指南 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:49 by zhyzzh
[考研] 求调剂，一志愿南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-04-03 10/500 2026-04-04 09:01 by T可可西里T
[考研] 考研调剂 +8 不爱喝饮料 2026-04-03 8/400 2026-04-03 16:40 by Mistake-J
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
[考研] 071000生物学调剂 +8 知昭蔓 2026-04-02 8/400 2026-04-03 10:36 by macy2011
[考研] 生物学硕341求调剂 +4 你笑起来像云朵 2026-04-03 4/200 2026-04-03 10:32 by macy2011
[考研] 316求调剂 +14 舟自梗 2026-04-01 18/900 2026-04-03 10:28 by linyelide
[考研] 一志愿深大085601材料工程专业（专硕）300分可以调剂去哪 +8 10160315 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:36 by hypershenger
[考研] 调剂 +7 祉岷. 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:11 by 花呗还欠600
[考研] 260求调剂 +6 朱芷琳 2026-04-02 6/300 2026-04-02 20:27 by 6781022
[考研] 一志愿346上海大学生物学 +3 上海大学346调剂 2026-04-01 3/150 2026-04-02 08:36 by w虫虫123
[考研] 349求调剂 +6 吃的不少 2026-04-01 6/300 2026-04-01 17:55 by JYD2011
[考研] 求调剂 +4 DADA怪 2026-03-31 4/200 2026-04-01 14:30 by ZXlzxl0425
[考研] 0855机械初试280求调剂 +3 kazenotori 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:08 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭