查看: 2409  |  回复: 19

Netherland

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 蓝冰天山 at 2013-10-07 19:12:28
上样量太大,减少上样量试试,如果是沉淀的话,是不是没有离心?

跑得上清  上样量已经很低了20ul
11楼2013-10-07 19:57:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝冰天山

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by Netherland at 2013-10-07 19:57:01
跑得上清  上样量已经很低了20ul...

20ul不算少了,我们最多也就20ul,上个10ul试试,或者跑个梯度看看是不是上样量的问题。看其他条带还好应该不是胶的问题

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2013-10-07 20:18:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by Netherland at 2013-10-07 19:55:46
跑了两次  胶也是重新做的  还是跑成这样  点样前都会沸水加热3分钟的...

1.样品应该充分溶解:保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解,上样前最好离心一下,实在溶解不掉的颗粒就去掉。
2.SDS电泳带变宽,SDS电泳带与邻近蛋白质电泳相连。除了上样量过多和样品溶解不完全外,凝胶的加样孔泄露会使得电泳带变宽。加样孔泄露往往由于凝胶与玻璃板之间产生裂纹引起。对策:此时只能重新制备凝胶,梳子拔起时要小心等凝胶凝聚完毕,速度不宜过快,拔起的方向要垂直于凝胶表面;要避免凝胶两侧的玻璃板与凝胶之间产生裂纹,在凝胶制备过程中不要挤压凝胶两侧的玻璃板。
-----------这两条你并没有改进...这和你跑电泳的次数无关。

更正4楼:沸水浴是100度,不是110度。
13楼2013-10-07 21:16:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这是15%以上浓度的胶跑诱导表达15kDa左右的蛋白吧?
我觉得这太正常不过了~~~~我跑小于15kDa的蛋白从来都是这鬼样子
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
14楼2013-10-07 21:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by Netherland at 2013-10-07 19:53:08
可是上面部分条带显示浓度较低啊...

即使上面的条带浓度低,如果下面的浓度过高也会造成这种现象。这也是为什么经纯化的蛋白的上样量要比粗提少很多的原因。
15楼2013-10-07 23:05:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样品蛋白浓度过高,甚至出现不溶的蛋白颗粒,建议上样前加热后离心,同时稀释样品
自主创业者,捣腾生物试剂
16楼2013-10-08 15:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RUI1990

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白量过大就会出现上面的情况,将其稀释一下再试试。
做自己
17楼2013-10-08 15:14:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ndsc

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
包涵体?样品浓度?还是标准品上太多了?!
18楼2013-10-08 17:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

剑客心语

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是上样量过大的原因,将样品稀释一下试试,我一般上样5~10ul。
一柄驻剑,一朝旅人,一颗常心,一生志言……行疆漫漫,品味一生……
19楼2013-10-12 16:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allen206

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白溶解buffer是什么?目标浓度多少?不要煮沸试一下,换成tricine page try try
不想说什么,,,,
20楼2013-10-12 16:46:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Netherland 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[职场人生] 40+中年人失业后,还能找到好工作吗? +6 xqy2009 2026-10-13 7/350 2026-10-15 14:22 by ichall
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗? 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬,路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
信息提示
请填处理意见