| 查看: 3073 | 回复: 6 | |||||
[交流]
SDS-page 原核表达蛋白 电泳条带弥散 已有6人参与
|
|
求助，最近做了N块胶，有15%的分离胶，也有5%-20%的梯度胶跑出来的蛋白不成条带？？以前不这样啊？ 菌液IPTG诱导完，离心沉淀菌体，PBS重悬，加4XSDS上样缓冲液（终浓度为1X）煮沸5min，13000rpm离心12min，在4℃保存，第二天电泳。 ![\"SDS-page](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2013/1006/w158h1911237_1381061914_706.jpg#opennewwindow\")  ![\"SDS-page](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2013/1006/w102h1911237_1381061927_393.jpg#opennewwindow\") |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 | 核酸生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有209人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SDS-PAGE电泳图条带分析
已经有19人回复
- 原核表达和SDS-PAGE
已经有9人回复
- SDS-page电泳蛋白样的处理
已经有4人回复
- 关于western blot SDS电泳时溴芬兰线弥散的问题
已经有8人回复
- SDS-PAGE蛋白电泳同一蛋白不同loading buffer条带不一样
已经有7人回复
- sds-page电泳时marker少跑出一条带是怎么回事？
已经有6人回复
- SDS-Page电泳没有条带，都是黑黑的一片，请教原因
已经有9人回复
- SDS-PAGE什么条带都没有
已经有10人回复
- SDS-PAGE 电泳蛋白分子量飘移
已经有12人回复
- 请教为啥SDS-PAGE电泳条带弥散？
已经有10人回复
- SDS-PAGE蛋白电泳
已经有23人回复
- 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？
已经有7人回复
- SDS-PAGE后面几条带弥散求助
已经有15人回复
- SDS-PAGE 我的样品没有跑出条带，请教高手！谢谢！
已经有7人回复
- SDS-PAGE电泳，菌液总蛋白，染色后显示的是弥散的
已经有5人回复
- SDS-PAGE蛋白电泳条带问题
已经有7人回复
- 【求助】SDS-PAGE电泳上样量
已经有6人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE蛋白电泳的蛋白条带回收
已经有8人回复
2楼2013-10-06 23:07:08
3楼2013-10-07 20:47:15
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-10-07 21:43:40
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-10-07 21:43:40
|
SDS电泳带弥散和拖尾的原因和改进措施(2013-10-7) 1.原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15µL（即2-10µg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100µL。 2.原因二：样品溶解不完全。 对策： （1）样品应该充分溶解：保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。 (2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液；如果是自行配置标准和未知样品，按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后，将其转移至Eppendorf管，盖上盖子（可以在盖子处加上卡子）后在110度沸水中水浴加热3分钟（可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞，Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止，把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中，薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面，便于取用和加热，也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中，盖子可能会被冲开），而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用，则将样品放入零下20度冰箱中储存，需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样，以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。 （3）改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解，SDS 用量要充分。 楼主的图看不见，更具楼主的情况加上一条： 3.原因三.原核细胞的表达产物发生了降解或者提前终止了翻译。 |
4楼2013-10-07 21:20:59
5楼2014-06-20 22:25:55
dongmings
木虫之王 (文学泰斗)
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 72971.6
- 红花: 6
- 帖子: 57340
- 在线: 987.9小时
- 虫号: 351746
- 注册: 2007-04-21
- 性别: GG
- 专业: 天然药物化学
6楼2014-11-22 15:22:40
7楼2014-11-22 15:33:43
5