应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎么预期酶切产物的大小？
91/1返回列表
查看: 1895  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pycraze

木虫 (小有名气)

[求助] 怎么预期酶切产物的大小？

看了很多基因克隆和表达的论文，其中很多论文都提到“PCR产物片段大小与预期结果相符”或者“表达的蛋白与预想的一致”，，，请问怎么预知PCR产物片段和所要表达的蛋白的大小？？
请各位虫友们指教指教，不胜感激！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-06 19:33:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-08 20:18:06
既然是做蛋白的重组表达，肯定是知道目的基因和目的蛋白的序列的啊，所以PCR产物也就是目的基因片段的大小就是已知的啊~~蛋白的大小如果不知道，根据氨基酸序列计算一下就可以啦
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

pycraze
岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-10-08 10:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑盖儿

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-08 20:18:12
你在做PCR之前，要先到NCBI上查找基因序列，那个时候就能确定基因的大小。在PCR以后要跑琼脂糖凝胶电泳，会点Marker，将PCR片段对照Marker就知道大小是不是符合要求了。
赞一下 回复此楼
我给不了你宝马香车，锦衣玉食，但我会用一辈子去疼你，爱你，保护你
3楼2013-10-08 12:50:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pycraze

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-10-08 10:54:49
既然是做蛋白的重组表达，肯定是知道目的基因和目的蛋白的序列的啊，所以PCR产物也就是目的基因片段的大小就是已知的啊~~蛋白的大小如果不知道，根据氨基酸序列计算一下就可以啦

如果是个新基因或新蛋白呢？那就不知道他的序列啊，，，那就没办法预知了吧？
还想问哈，如果是几丁质酶，那所有同类型细胞（真核或原核）里面的编码几丁质酶的序列都是一样的吗？谢谢~
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-08 18:03:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pycraze

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 黑盖儿 at 2013-10-08 12:50:17
你在做PCR之前，要先到NCBI上查找基因序列，那个时候就能确定基因的大小。在PCR以后要跑琼脂糖凝胶电泳，会点Marker，将PCR片段对照Marker就知道大小是不是符合要求了。

那如果是未知基因呢，那不就查不到了？？那又怎么确定基因的大小了？
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-08 18:05:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑盖儿

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pycraze at 2013-10-08 18:05:34
那如果是未知基因呢，那不就查不到了？？那又怎么确定基因的大小了？...

未知基因也是一样要PCR，只不过用的引物不一样，PCR以后跑个琼脂糖凝胶电泳，对照一下Marker就可以大体判断一下大小了，如果要精确判断的话，还需要连接到质粒上，拿去测个序就知道了。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

pycraze
我给不了你宝马香车，锦衣玉食，但我会用一辈子去疼你，爱你，保护你
6楼2013-10-09 09:40:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pycraze

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 黑盖儿 at 2013-10-09 09:40:18
未知基因也是一样要PCR，只不过用的引物不一样，PCR以后跑个琼脂糖凝胶电泳，对照一下Marker就可以大体判断一下大小了，如果要精确判断的话，还需要连接到质粒上，拿去测个序就知道了。...

我的意思是，如果是未知基因那就不能提到“PCR产物片段大小与预期结果相符”了吧？
赞一下 回复此楼
7楼2013-10-09 10:07:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑盖儿

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by pycraze at 2013-10-09 10:07:35
我的意思是，如果是未知基因那就不能提到“PCR产物片段大小与预期结果相符”了吧？...

可以的。有时候他们为了研究某一种蛋白，把这种蛋白纯化测序，已经知道了氨基酸的数量，可以推测出基因的预期大小（通常适用于未经过剪切的肽链构成的蛋白）
赞一下(1人) 回复此楼
我给不了你宝马香车，锦衣玉食，但我会用一辈子去疼你，爱你，保护你
8楼2013-10-09 10:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pycraze at 2013-10-08 18:03:48
如果是个新基因或新蛋白呢？那就不知道他的序列啊，，，那就没办法预知了吧？
还想问哈，如果是几丁质酶，那所有同类型细胞（真核或原核）里面的编码几丁质酶的序列都是一样的吗？谢谢~...

如果是未知基因或蛋白，当然无从说起“与预期大小一致”，但是也就不可能做重组表达了。

对于同一种蛋白在不同表达系统中的编码当然不会都一样了，首先秘密子的偏好性不同；而且就是同一种属内也会有不同的，基因多态性么。
赞一下 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心
9楼2013-10-09 13:26:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pycraze 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭