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pycraze

木虫 (小有名气)

[求助] 怎么预期酶切产物的大小?

看了很多基因克隆和表达的论文,其中很多论文都提到“PCR产物片段大小与预期结果相符”或者“表达的蛋白与预想的一致”,,,请问怎么预知PCR产物片段和所要表达的蛋白的大小??
请各位虫友们指教指教,不胜感激!!!
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黑盖儿

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-08 20:18:12
你在做PCR之前,要先到NCBI上查找基因序列,那个时候就能确定基因的大小。在PCR以后要跑琼脂糖凝胶电泳,会点Marker,将PCR片段对照Marker就知道大小是不是符合要求了。
我给不了你宝马香车,锦衣玉食,但我会用一辈子去疼你,爱你,保护你
3楼2013-10-08 12:50:17
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bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-08 20:18:06
既然是做蛋白的重组表达,肯定是知道目的基因和目的蛋白的序列的啊,所以PCR产物也就是目的基因片段的大小就是已知的啊~~蛋白的大小如果不知道,根据氨基酸序列计算一下就可以啦

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

岂能尽如人意,但求无愧我心
2楼2013-10-08 10:54:49
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pycraze

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-10-08 10:54:49
既然是做蛋白的重组表达,肯定是知道目的基因和目的蛋白的序列的啊,所以PCR产物也就是目的基因片段的大小就是已知的啊~~蛋白的大小如果不知道,根据氨基酸序列计算一下就可以啦

如果是个新基因或新蛋白呢?那就不知道他的序列啊,,,那就没办法预知了吧?
还想问哈,如果是几丁质酶,那所有同类型细胞(真核或原核)里面的编码几丁质酶的序列都是一样的吗?谢谢~
4楼2013-10-08 18:03:48
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pycraze

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 黑盖儿 at 2013-10-08 12:50:17
你在做PCR之前,要先到NCBI上查找基因序列,那个时候就能确定基因的大小。在PCR以后要跑琼脂糖凝胶电泳,会点Marker,将PCR片段对照Marker就知道大小是不是符合要求了。

那如果是未知基因呢,那不就查不到了??那又怎么确定基因的大小了?
5楼2013-10-08 18:05:34
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