| 查看: 2764 | 回复: 8 | ||||
[求助]
SDS-PAGE泳道形状诡异
|
|
跑SDS-PAGE把细胞裂解液上样结果跑出来这么奇怪的形状(最右边两个泳道) 我可以保证不是胶制备的问题, 换了好几块胶了 上样的时候其他的泳道都没问题,就是只要把这个细胞裂解液加上去,对应的泳道就肯定就跑成这鬼样子 电解缓冲液也没问题, 实验室其他人拿我配的缓冲液跑都没事 大概就是这裂解液样品的问题....请问这是不是盐浓度太高了?还是盐浓度太低了?我这里面还有少量NP-40,不应该影响吧？大概还会残留一些养细胞用的MEM... 见了鬼了，按理说我这缓冲液最多只是PBS   yf_6_131_linker_pulldown_cbb.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有84人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SDS-PAGE电泳marker和样品的条带是歪的
已经有12人回复
- SDS-PAGE电泳图条带分析
已经有19人回复
- 为什么SDS-PAGE胶在做胶的时候会出现不均匀的条纹？
已经有17人回复
- SDS-PAGE银染求诊断
已经有8人回复
- SDS-PAGE菌液裂解问题
已经有6人回复
- SDS PAGE 小肽？
已经有15人回复
- SDS-PAGE
已经有16人回复
- 紧急求助:SDS-PAGE上样一定要调蛋白含量吗？
已经有9人回复
- SDS-PAGE电泳看不到条带是什么原因？
已经有6人回复
- SDS-PAGE样品浓缩的方法
已经有12人回复
- sds page 跑不出条带
已经有11人回复
- SDS-PAGE和PAGE的区别（SDS-PAGE测出来的一定就是蛋白质相对分子质量？）
已经有17人回复
- SDS-PAGE 蛋白胶跑胶问题
已经有27人回复
- 关于SDS-PAGE电泳问题
已经有12人回复
- SDS-PAGE 凝胶电泳的样品处理
已经有5人回复
- SDS-PAGE电泳溴酚蓝前沿线和样品带在一条线上是什么原因啊。
已经有14人回复
- SDS-PAGE求助~~HELP!
已经有17人回复
- 【求助】SDS-PAGE电泳上样量
已经有6人回复
- 【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮，SDS-PAGE结果差异显著，这是为何？
已经有20人回复
同东中郎将
新虫 (小有名气)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 318.1
- 帖子: 99
- 在线: 34.3小时
- 虫号: 2417234
- 注册: 2013-04-14
- 性别: GG
- 专业: 作物栽培与耕作学
2楼2013-10-05 08:57:35
3楼2013-10-05 09:24:45
yonghuixie
禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-10-05 17:01:50
fuyuandj86: 金币+2, ★有帮助 2013-10-06 01:09:28
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-10-05 17:01:50
fuyuandj86: 金币+2, ★有帮助 2013-10-06 01:09:28
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2013-10-05 14:28:51
5楼2013-10-05 21:29:07
6楼2013-10-06 01:07:25
makubex83
至尊木虫 (知名作家)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 32123.6
- 散金: 407
- 红花: 1
- 帖子: 9908
- 在线: 355.9小时
- 虫号: 713747
- 注册: 2009-03-03
- 性别: GG
- 专业: 食品科学
7楼2013-10-06 23:05:39
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
|
楼主的样品电泳时不仅带非常宽甚至可以说是弥散，所以不可能是段春上样过多的问题，样品处理的也不好。电压也可考虑调整。 1.样品处理（充分溶解样品）：根据样品分离目的不同，在上样前对样品进行的溶解处理主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。 （1）还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT(或Beta巯基乙醇)后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。 （2）带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带;另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。100μl样品缓冲液中10μl 20%的碘乙酸胺，并在室温保温30min。 （3）非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用1%SDS沸水中煮3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。 2.保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。 3.减少上样量，楼主的样品应该稀释十倍后再上样。 4.可以考虑加高电泳时，浓缩胶的电压为90-100 V，分离胶的电压到120V-200V，；浓缩胶和分离胶有时候可能都设成150 V也能电泳成功。 5.上样前要煮沸样品蛋白质。 |
8楼2013-10-07 15:01:11
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
|
更准确的回答： 楼主的电泳问题是SDS电泳带弥散、拖尾，原因和解决方法如下（我今天下午刚写好的材料）： SDS电泳带弥散和拖尾的原因和改进措施(2013-10-7) 1.原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15µL（即2-10µg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100µL。 2.原因二：样品溶解不完全。 对策： （1）样品应该充分溶解：保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。 (2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液；如果是自行配置标准和未知样品，按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后，将其转移至Eppendorf管，盖上盖子（可以在盖子处加上卡子）后在110度沸水中水浴加热3分钟（可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞，Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止，把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中，薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面，便于取用和加热，也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中，盖子可能会被冲开），而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用，则将样品放入零下20度冰箱中储存，需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样，以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。 （3）改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解，SDS 用量要充分。 |
9楼2013-10-07 16:26:50
