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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

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[求助] SDS-PAGE泳道形状诡异

跑SDS-PAGE把细胞裂解液上样结果跑出来这么奇怪的形状(最右边两个泳道)
我可以保证不是胶制备的问题, 换了好几块胶了
上样的时候其他的泳道都没问题,就是只要把这个细胞裂解液加上去,对应的泳道就肯定就跑成这鬼样子
电解缓冲液也没问题, 实验室其他人拿我配的缓冲液跑都没事
大概就是这裂解液样品的问题....请问这是不是盐浓度太高了?还是盐浓度太低了?我这里面还有少量NP-40,不应该影响吧？大概还会残留一些养细胞用的MEM...
见了鬼了，按理说我这缓冲液最多只是PBS

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

1楼 2013-10-05 08:21:08

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凌波丽

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更准确的回答：

楼主的电泳问题是SDS电泳带弥散、拖尾，原因和解决方法如下（我今天下午刚写好的材料）：

SDS电泳带弥散和拖尾的原因和改进措施(2013-10-7)

1.原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15µL（即2-10µg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100µL。
2.原因二：样品溶解不完全。
对策：
（1）样品应该充分溶解：保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。
(2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液；如果是自行配置标准和未知样品，按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后，将其转移至Eppendorf管，盖上盖子（可以在盖子处加上卡子）后在110度沸水中水浴加热3分钟（可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞，Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止，把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中，薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面，便于取用和加热，也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中，盖子可能会被冲开），而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用，则将样品放入零下20度冰箱中储存，需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样，以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。
（3）改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解，SDS 用量要充分。