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mhmtf

铜虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE

各位大侠，小弟最近跑蛋白质电泳郁闷了 特向各位求助：样品点样孔中的溴酚蓝指示剂会不断的向泳道两边扩张，最后所有的泳道都连成一条线，一起往下跑。经染色脱色后，结果显示各泳道的蛋白都连成一条线，也就是胶上看不到一条一条竖直的泳道，各蛋白条带都连成一条直线，这到底是什么原因啊？忘各位大侠不吝赐教，万分感激！@
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gdfh
1楼 2012-07-05 20:39:26
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果子么么茶

木虫 (著名写手)
胶是不是没配好 缓冲液是不是不对
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2楼2012-07-05 21:51:15
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boyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能不能提供一下电泳图片。。。。。
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自由之思想，独立之灵魂
3楼2012-07-05 23:02:05
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我跑的电泳基本上指示剂都是连在一起的。只要上样的时候样品不溢出上样控就行。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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相信自己，一定能成功！
4楼2012-07-06 00:23:27
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windsor2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-06 13:38:29
你配胶的水，上下两层胶用的Tris-Hcl可能有问题，建议你换一下水（最好用蒸馏水），测一下Tris-Hcl的PH值是否准确，然后再重新配胶，用新的缓冲液试试看。我想效果会好的。
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只要功夫深铁杵磨成针
5楼2012-07-06 08:40:10
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mhmtf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2012-07-05 21:51:15
胶是不是没配好 缓冲液是不是不对

胶应该啊 用别的实验室的胶跑 好像也是一样的
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gdfh
6楼2012-07-06 14:31:40
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mhmtf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by boyx at 2012-07-05 23:02:05
能不能提供一下电泳图片。。。。。

恩~~

做右边是marker，左边就是不同时间段取的样，我的样品是毕赤酵母分泌表达上清
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gdfh
7楼2012-07-06 14:37:43
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mhmtf

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chui2004 at 2012-07-06 00:23:27
我跑的电泳基本上指示剂都是连在一起的。只要上样的时候样品不溢出上样控就行。

问题是 染色脱色完以后，各蛋白也连成一条线 根本就不能判断我的目的蛋白有没有表达~
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gdfh
8楼2012-07-06 14:39:00
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qiuqu_200212

至尊木虫 (知名作家)

无助又无奈

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
SDS-PAGE的结果好坏，主要是制胶是关键，点样、脱色也会有影响。
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无奈又无助的天鹅，孤零零
9楼2012-07-06 16:04:03
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biomater

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-07 13:43:42
mhmtf: 金币+1 2012-07-08 19:30:26
有图有真相。。。
图中显示你的样品的Maker没有问题，是一条带，清晰而且有界限。
那么问题一定出现在你的样品上，测下样品的电导率，我觉得样品的电导是个问题。电导率过大会影响电泳的效果！
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焚琴煮鹤岂不快哉。。。。。。
10楼2012-07-06 17:54:21
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