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sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-07 13:43:57
mhmtf: 金币+2 2012-07-08 19:30:04
以下问题，请考虑：

1 是否浓缩胶占的比例太小？新手往往认为，分离胶的比例大一些，蛋白分离效果会好一些，其实不然。浓缩胶占的比例太小，达不到聚集蛋白的目的。
2 你跑的胶比较模糊不清，检查溶液的pH值是否正确？
3 将非点样孔点上不含样品的上样Buffer
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11楼2012-07-06 18:03:53
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boyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by mhmtf at 2012-07-06 14:37:43
恩~~
a3/56/1245447_1341556590_298.jpg
做右边是marker，左边就是不同时间段取的样，我的样品是毕赤酵母分泌表达上清
...

你看你的Marker 跑的这么好，那么你的制胶是是没问题的，所以问题出在你的样品上，仔细查查是哪里出现问题。。。
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自由之思想，独立之灵魂
12楼2012-07-06 18:28:32
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得是你的梳子的问题，你的梳子和压条不配套
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13楼2012-07-07 08:46:24
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by mhmtf at 2012-07-06 14:39:00
问题是 染色脱色完以后，各蛋白也连成一条线 根本就不能判断我的目的蛋白有没有表达~...

蛋白表达应该是很明显的，与阴性对照有明显的差异的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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相信自己，一定能成功！
14楼2012-07-07 11:32:26
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mhmtf: 金币+1 2012-07-08 19:29:52
赞同4楼的意见，确定下配胶的水和Tris-HCl的pH值吧。不过Marker没有问题，还需要进一步排除下。
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15楼2012-07-07 12:57:22
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eiieen

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mhmtf: 金币+1 2012-07-08 19:29:45
样品变性过了吗？
加样前，用枪把泳道吹吹
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16楼2012-07-07 20:45:49
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甘富

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mhmtf at 2012-07-06 14:37:43
恩~~
a3/56/1245447_1341556590_298.jpg
做右边是marker，左边就是不同时间段取的样，我的样品是毕赤酵母分泌表达上清
...

你的marker跑出来没有问题，就不是胶的事，只要浓缩胶和分离胶的PH没问题，配胶应该问题不大，我觉得可能是提蛋白的事，蛋白有问题。
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实践出真知！
17楼2012-07-08 10:24:31
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