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sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-07 13:43:57
mhmtf: 金币+2 2012-07-08 19:30:04
以下问题,请考虑:

1 是否浓缩胶占的比例太小?新手往往认为,分离胶的比例大一些,蛋白分离效果会好一些,其实不然。浓缩胶占的比例太小,达不到聚集蛋白的目的。
2 你跑的胶比较模糊不清,检查溶液的pH值是否正确?
3 将非点样孔点上不含样品的上样Buffer
11楼2012-07-06 18:03:53
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boyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by mhmtf at 2012-07-06 14:37:43
恩~~
a3/56/1245447_1341556590_298.jpg
做右边是marker,左边就是不同时间段取的样,我的样品是毕赤酵母分泌表达上清
...

你看你的Marker 跑的这么好,那么你的制胶是是没问题的,所以问题出在你的样品上,仔细查查是哪里出现问题。。。
自由之思想,独立之灵魂
12楼2012-07-06 18:28:32
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得是你的梳子的问题,你的梳子和压条不配套
13楼2012-07-07 08:46:24
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by mhmtf at 2012-07-06 14:39:00
问题是 染色脱色完以后,各蛋白也连成一条线 根本就不能判断我的目的蛋白有没有表达~...

蛋白表达应该是很明显的,与阴性对照有明显的差异的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
相信自己,一定能成功!
14楼2012-07-07 11:32:26
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mhmtf: 金币+1 2012-07-08 19:29:52
赞同4楼的意见,确定下配胶的水和Tris-HCl的pH值吧。不过Marker没有问题,还需要进一步排除下。
15楼2012-07-07 12:57:22
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eiieen

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mhmtf: 金币+1 2012-07-08 19:29:45
样品变性过了吗?
加样前,用枪把泳道吹吹
16楼2012-07-07 20:45:49
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甘富

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by mhmtf at 2012-07-06 14:37:43
恩~~
a3/56/1245447_1341556590_298.jpg
做右边是marker,左边就是不同时间段取的样,我的样品是毕赤酵母分泌表达上清
...

你的marker跑出来没有问题,就不是胶的事,只要浓缩胶和分离胶的PH没问题,配胶应该问题不大,我觉得可能是提蛋白的事,蛋白有问题。
实践出真知!
17楼2012-07-08 10:24:31
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