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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，sds-page跑胶都糊成一片了，~~o(>_<)o ~~
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助，sds-page跑胶都糊成一片了，~~o(>_<)o ~~

从左到右是maker，样品a，样品b。a和b分别是微生物蛋白和蚯蚓蛋白，提取方法不一样，主要是裂解液成分不一样。maker跑的没问题，应该不是胶制作问题吧。b样品基本上也还可以，但是显然被a影响到了的。我怀疑是不是a样品裂解液中的成分有问题啊，以至于溶解了胶？a确实是浓度有点小，但依稀没糊的地方还可以看到一点点条带的，但是越跑越弥散，最后就这样了。。。桑心
我是半路出家弄分子生物的，初次接触蛋白，还望各位有经验的虫子指点，谢谢！
求助，sds-page跑胶都糊成一片了，~~o(>_<)o ~~
DSC_0568.jpg

[ Last edited by 一苇杭之xmc on 2013-9-27 at 20:59 ]
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欲速则不达
1楼 2013-09-27 20:58:04
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ritchiejin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这位同学是南大的么？
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8楼2013-09-30 14:46:02
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查看全部 12 个回答

zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-28 13:19:03
蛋白浓度小到PAGE夫法检测，还有就是你的蛋白已经降解，条带就会弥散。
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成功，就是成为你想成为的人
2楼2013-09-28 10:47:21
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-09-28 13:19:15
可能原因与解决：
1.蛋白质发生了降解。处理办法：重新提取蛋白质，加入蛋白酶抑制剂。
2.样品浓缩效果不好。处理办法：样品上样前煮沸充分，适当增加浓缩胶的长度;保证浓缩胶贮液的pH正确(6.7)，适当降低电压。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。
3.拖尾严重，样品溶解解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。
处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂（比如表面活性剂）；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。

仅供参考！
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3楼2013-09-28 11:11:47
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangbighui at 2013-09-28 10:47:21
蛋白浓度小到PAGE夫法检测，还有就是你的蛋白已经降解，条带就会弥散。

我的蛋白浓度大概有0.8g/L左右，上样量是30微升，好像符合跑胶所需的浓度啊。还有就是我蛋白都是前一天提取，第二天跑胶，提取之后就放在冰箱里面了。
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欲速则不达
4楼2013-09-29 14:27:03
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