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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，sds-page跑胶都糊成一片了，~~o(>_<)o ~~
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助，sds-page跑胶都糊成一片了，~~o(>_<)o ~~

从左到右是maker，样品a，样品b。a和b分别是微生物蛋白和蚯蚓蛋白，提取方法不一样，主要是裂解液成分不一样。maker跑的没问题，应该不是胶制作问题吧。b样品基本上也还可以，但是显然被a影响到了的。我怀疑是不是a样品裂解液中的成分有问题啊，以至于溶解了胶？a确实是浓度有点小，但依稀没糊的地方还可以看到一点点条带的，但是越跑越弥散，最后就这样了。。。桑心
我是半路出家弄分子生物的，初次接触蛋白，还望各位有经验的虫子指点，谢谢！
求助，sds-page跑胶都糊成一片了，~~o(>_<)o ~~
DSC_0568.jpg

[ Last edited by 一苇杭之xmc on 2013-9-27 at 20:59 ]
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欲速则不达
1楼 2013-09-27 20:58:04
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zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-28 13:19:03
蛋白浓度小到PAGE夫法检测，还有就是你的蛋白已经降解，条带就会弥散。
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成功，就是成为你想成为的人
2楼2013-09-28 10:47:21
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-09-28 13:19:15
可能原因与解决：
1.蛋白质发生了降解。处理办法：重新提取蛋白质，加入蛋白酶抑制剂。
2.样品浓缩效果不好。处理办法：样品上样前煮沸充分，适当增加浓缩胶的长度;保证浓缩胶贮液的pH正确(6.7)，适当降低电压。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。
3.拖尾严重，样品溶解解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。
处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂（比如表面活性剂）；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。

仅供参考！
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3楼2013-09-28 11:11:47
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangbighui at 2013-09-28 10:47:21
蛋白浓度小到PAGE夫法检测，还有就是你的蛋白已经降解，条带就会弥散。

我的蛋白浓度大概有0.8g/L左右，上样量是30微升，好像符合跑胶所需的浓度啊。还有就是我蛋白都是前一天提取，第二天跑胶，提取之后就放在冰箱里面了。
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欲速则不达
4楼2013-09-29 14:27:03
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-09-28 11:11:47
可能原因与解决：
1.蛋白质发生了降解。处理办法：重新提取蛋白质，加入蛋白酶抑制剂。
2.样品浓缩效果不好。处理办法：样品上样前煮沸充分，适当增加浓缩胶的长度;保证浓缩胶贮液的pH正确(6.7)，适当降低电压。一 ...

和裂解液的成分会不会有关系？我提取完之后就直接拿来跑胶了的。
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欲速则不达
5楼2013-09-29 14:28:30
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 一苇杭之xmc at 2013-09-29 14:28:30
和裂解液的成分会不会有关系？我提取完之后就直接拿来跑胶了的。...

还有一个疑问就是，中间的泳道已经影响到其周围的泳道了，是不是上样的样品中还有对胶本身不好的成分啊？
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欲速则不达
6楼2013-09-29 14:30:08
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 17:27:45
和裂解液有关。我做过酵母总蛋白提取，裂解液中含有8M的尿素，跑出来的条带也是歪歪扭扭，跑成笑脸或者哭脸，总之条带很诡异。很多裂解液对跑胶的带型都有影响。
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7楼2013-09-30 14:33:06
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ritchiejin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这位同学是南大的么？
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8楼2013-09-30 14:46:02
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qapollo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

除了样品的问题你也可以考虑一下电泳缓冲液是不是没加够，从胶片上看有两条规则痕迹，我估计是中间电流没联通或是缓冲液浓度不正常电压过不去导致条带上弯，可以适当调整一下。
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9楼2013-10-02 18:32:17
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ritchiejin at 2013-09-30 14:46:02
这位同学是南大的么？

不是的哦
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欲速则不达
10楼2013-10-08 19:11:14
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