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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助,sds-page跑胶都糊成一片了,~~o(>_<)o ~~

从左到右是maker,样品a,样品b。a和b分别是微生物蛋白和蚯蚓蛋白,提取方法不一样,主要是裂解液成分不一样。maker跑的没问题,应该不是胶制作问题吧。b样品基本上也还可以,但是显然被a影响到了的。我怀疑是不是a样品裂解液中的成分有问题啊,以至于溶解了胶?a确实是浓度有点小,但依稀没糊的地方还可以看到一点点条带的,但是越跑越弥散,最后就这样了。。。桑心
我是半路出家弄分子生物的,初次接触蛋白,还望各位有经验的虫子指点,谢谢!
求助,sds-page跑胶都糊成一片了,~~o(>_<)o ~~
DSC_0568.jpg

[ Last edited by 一苇杭之xmc on 2013-9-27 at 20:59 ]
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欲速则不达
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-09-28 11:11:47
可能原因与解决:
1.蛋白质发生了降解。处理办法:重新提取蛋白质,加入蛋白酶抑制剂。
2.样品浓缩效果不好。处理办法:样品上样前煮沸充分,适当增加浓缩胶的长度;保证浓缩胶贮液的pH正确(6.7),适当降低电压。一 ...

和裂解液的成分会不会有关系?我提取完之后就直接拿来跑胶了的。
欲速则不达
5楼2013-09-29 14:28:30
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zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-28 13:19:03
蛋白浓度小到PAGE夫法检测,还有就是你的蛋白已经降解,条带就会弥散。
成功,就是成为你想成为的人
2楼2013-09-28 10:47:21
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-09-28 13:19:15
可能原因与解决:
1.蛋白质发生了降解。处理办法:重新提取蛋白质,加入蛋白酶抑制剂。
2.样品浓缩效果不好。处理办法:样品上样前煮沸充分,适当增加浓缩胶的长度;保证浓缩胶贮液的pH正确(6.7),适当降低电压。一般电泳均按这种方式处理,样品稀释适当浓度,加入上样Buffer,离心,沸水煮5min,再离心加样。
3.拖尾严重,样品溶解解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。
处理办法:加样前离心;选择适当的样品缓冲液,加适量样品促溶剂(比如表面活性剂);电泳缓冲液时间过长,重新配制;降低凝胶浓度。

仅供参考!
3楼2013-09-28 11:11:47
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangbighui at 2013-09-28 10:47:21
蛋白浓度小到PAGE夫法检测,还有就是你的蛋白已经降解,条带就会弥散。

我的蛋白浓度大概有0.8g/L左右,上样量是30微升,好像符合跑胶所需的浓度啊。还有就是我蛋白都是前一天提取,第二天跑胶,提取之后就放在冰箱里面了。
欲速则不达
4楼2013-09-29 14:27:03
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