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tangmincui新虫 (小有名气)
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[交流]
蛋白纯化，现在有四条蛋白条带不知道怎么分开，求助大侠！
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我是从菌体超声后上清中发现有活性的菌，老师让我纯化出功能蛋白。我将菌体超声后离心，将上清过滤，作为样品。最开始用试管小试法，初步确定阴离子交换能挂住蛋白，并且在0到1MNaCl中洗脱出(0,200,300,500,800,1000mmolNaCl)活性蛋白.所以决定用DEAE阴离子交换来，纯化蛋白，过柱子。柱子是1ml预装柱。 上样量：3ml，平衡液：Tris-HCl pH 7.4（50mMTris，50mM NaCl）,洗脱液：1MNaCl (之前没测PH值，有一次测了是7.36)但是每次都洗脱出活性蛋白了。冻干后跑电泳，有四条带，大约是66KDa，44KDa，30KDa，20KDa，重复了5次结果都是这样。 上样量3ml可能有点大，但是改成1ml时，收集的蛋白活性不好了。 请问大侠，改变ph怎么改变，怎么分离这四种蛋白， 木有金币了，谢谢大家了。 |
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