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tangmincui

新虫 (小有名气)

[交流] 蛋白纯化,现在有四条蛋白条带不知道怎么分开,求助大侠!

我是从菌体超声后上清中发现有活性的菌,老师让我纯化出功能蛋白。我将菌体超声后离心,将上清过滤,作为样品。最开始用试管小试法,初步确定阴离子交换能挂住蛋白,并且在0到1MNaCl中洗脱出(0,200,300,500,800,1000mmolNaCl)活性蛋白.所以决定用DEAE阴离子交换来,纯化蛋白,过柱子。柱子是1ml预装柱。
上样量:3ml,平衡液:Tris-HCl pH 7.4(50mMTris,50mM NaCl),洗脱液:1MNaCl (之前没测PH值,有一次测了是7.36)但是每次都洗脱出活性蛋白了。冻干后跑电泳,有四条带,大约是66KDa,44KDa,30KDa,20KDa,重复了5次结果都是这样。

上样量3ml可能有点大,但是改成1ml时,收集的蛋白活性不好了。

请问大侠,改变ph怎么改变,怎么分离这四种蛋白,

木有金币了,谢谢大家了。
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