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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 跪求各位大侠进来看看，神奇的双酶切电泳图片是怎么回事？
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guoyanfei

金虫 (小有名气)

[求助] 跪求各位大侠进来看看，神奇的双酶切电泳图片是怎么回事？

各位大侠，我做了两个载体的双酶切电泳片子，双酶切条带大小分别是360（图片中第二泳道）和560（图片中第四泳道），做了好几次还是这样的结果，下面老是有一大坨东西，不知道是什么原因，求各位大侠指导。Marker是DL2000的，从上到下大小分别是：2000、1000、750、500、250、100
跪求各位大侠进来看看，神奇的双酶切电泳图片是怎么回事？
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1楼 2013-09-17 16:31:31
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-18 10:25:20
1) 酶切时间过长，可能导致酶自身特异性降低或丧失，导致误切，可能会产生单个条带。
2）酶自身质量不太好或者双切buffer使用不当，产生星号活性；
3）可能是抽提的重组质粒有些问题

建议：抗性平板上画线培养，挑取线上的单克隆重新扩摇，检测为阳性后（可采用菌液PCR和质粒粗提酶切检测相结合的方针筛选阳性克隆），扩摇新鲜菌液提取质粒。看是否为质粒自身的问题；
         选用相同酶类的其他批次或品牌酶切；
         根据重组质粒酶切位点和片段酶切位点选取其他酶试酶切；
         缩短酶切时间，电泳时除去marker外可加质粒、单酶切的线性质粒做对照，看单酶切片段大小是否和载体自身大小及目标片段相吻合。
       相互学习，共同进步，祝好运，别的也不知道说啥了！
赞一下(2人) 回复此楼
特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
2楼2013-09-17 19:00:10
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guoyanfei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2013-09-17 19:00:10
1) 酶切时间过长，可能导致酶自身特异性降低或丧失，导致误切，可能会产生单个条带。
2）酶自身质量不太好或者双切buffer使用不当，产生星号活性；
3）可能是抽提的重组质粒有些问题

建议：抗性平板上画线培养 ...

谢谢回复,你说的在理,我重新做一次,看看效果吧
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3楼2013-09-17 22:54:28
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