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guoyanfei金虫 (小有名气)
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[求助]
跪求各位大侠进来看看，神奇的双酶切电泳图片是怎么回事？
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各位大侠，我做了两个载体的双酶切电泳片子，双酶切条带大小分别是360（图片中第二泳道）和560（图片中第四泳道），做了好几次还是这样的结果，下面老是有一大坨东西，不知道是什么原因，求各位大侠指导。Marker是DL2000的，从上到下大小分别是：2000、1000、750、500、250、100 2013-8-23.JPG |
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yudaoqian88
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不良人
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-18 10:25:20
感谢参与，应助指数 +1
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1) 酶切时间过长，可能导致酶自身特异性降低或丧失，导致误切，可能会产生单个条带。 2）酶自身质量不太好或者双切buffer使用不当，产生星号活性； 3）可能是抽提的重组质粒有些问题 建议：抗性平板上画线培养，挑取线上的单克隆重新扩摇，检测为阳性后（可采用菌液PCR和质粒粗提酶切检测相结合的方针筛选阳性克隆），扩摇新鲜菌液提取质粒。看是否为质粒自身的问题； 选用相同酶类的其他批次或品牌酶切； 根据重组质粒酶切位点和片段酶切位点选取其他酶试酶切； 缩短酶切时间，电泳时除去marker外可加质粒、单酶切的线性质粒做对照，看单酶切片段大小是否和载体自身大小及目标片段相吻合。 相互学习，共同进步，祝好运，别的也不知道说啥了！ |
2楼2013-09-17 19:00:10
guoyanfei
金虫 (小有名气)
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3楼2013-09-17 22:54:28