| 查看: 1163 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lizhijiang木虫 (著名写手)
|
[交流]
蛋白酶活性测定-酶谱法已有3人参与
|
||
|
酶谱法是测定蛋白酶活性的一种敏感方法之一，是用含蛋白酶作用底物的蛋白制成的分离胶，由于酶解作用使胶中相应底物发生分解，致使酶解部分背景透明；也可检测酶对casein或特异性底物作用的方法之一。 现将文献和本人写作中提到的酶方法做一简要英文介绍。简言之，与SDS-PAGE法有极其类似之处。区别在于，酶谱法：1、样品不用煮沸。2、在分离胶中取出部分水溶解casein或特异性蛋白底物，制成含0.1或0.5%酶作用底物的分离胶（再在分离胶中加入所需的分离胶制备用水）。3、酶作用的底物嵌于分离胶中，因此与普通SDS-PAGE胶相比，胶空隙更小。因此，不可用marker，因为分离胶中遍布蛋白底物，染色后除酶解部位是透明颜色，而其他部分蓝色。4、电泳后，孵育过程很重要，所以溶液配制中，尤其钙离子激活酶活很重要；染色、脱色与sds-page差别不大。 如有疑问，可在回帖中交流。不当之处请指导。 Zymography The proteolytic zymography was performed in conjunction with SDS-PAGE according to the modified method of García-Carreño et al. and Laemmli. Ten percent separating gel was prepared in the presence of the final concentration of 0.1% casein or specific substrate, respectively. The enzyme, or specific enzyme were loaded on the 5% stacking gel and run electrophoresis. After electrophoresis, the gels were rinsed in distilled water and eluted for 40 min in a shaking water bath with 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6) containing 2.5% Triton X-100 and 5 mmol/L CaCl2. Subsequently, the casein- and specific substrate -zymography gel were washed with 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6) containing 5 mmol/L CaCl2 for 40 min and incubated with 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.4) containing 150 mmol/L NaCl, 10 mmol/L CaCl2, and 0.02% NaN3 at 37 ℃ for 42 h. Then the gels were stained by Coomassie brilliant blue R-250 for 3 h and rinsed by the destainer containing 40% ethanol and 10% acetic acid. |
回复此楼» 猜你喜欢
三无产品还有机会吗
已经有6人回复
-
垃圾破二本职称评审标准
已经有7人回复
-
投稿返修后收到这样的回复，还有希望吗
已经有7人回复
-
博士申请都是内定的吗？
已经有14人回复
-
谈谈两天一夜的“延安行”
已经有13人回复
-
氨基封端PDMS和HDI反应快速固化
已经有11人回复
-
之前让一硕士生水了7个发明专利，现在这7个获批发明专利的维护费可从哪儿支出哈？
已经有11人回复
-
论文投稿求助
已经有4人回复
-
Applied Surface Science 这个期刊。有哪位虫友投过的能把word模板发给我参考一下嘛
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- BAEE测定胰蛋白酶活性
已经有6人回复
- 关于几种抗氧化酶活性（CAT POD）测定的问题~
已经有17人回复
- 关于蛋白酶水解酪蛋白判断蛋白酶活性的问题
已经有9人回复
- 蛋白酶活力测定方法（国标）
已经有296人回复
- 求助：过氧化物酶提取及活性测定，颜色、吸光度都无变化
已经有9人回复
- 不同类别的蛋白酶的活力测定
已经有12人回复
- 蛋白酶测定方法
已经有11人回复
- p-NPP法测定脂肪酶活性p-NP标准曲线问题
已经有9人回复
- 酶活性测定
已经有16人回复
- 福林酚法测定蛋白酶活力出现问题了
已经有11人回复
- 蛋白酶菌株酶活问题
已经有10人回复
- 碘量法测定淀粉酶活性的问题
已经有14人回复
- 请教脂肪酶活性测定
已经有14人回复
- 紫外分光光度法测蛋白酶活
已经有19人回复
- 【求助】求助半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶活性测定方法
已经有11人回复
- 【求助】求助关于土壤蛋白酶和蔗糖酶测定所遇到的问题
已经有14人回复
- 【求助】SOD活性测定方法
已经有14人回复
- 【求助/交流】求助测木瓜蛋白酶活性的方法！！！
已经有9人回复
- 【求助】蛋白酶活力测定
已经有7人回复
- 求蛋白酶活性检测范围
已经有1人回复
- 【求助】超氧化物歧化酶活性测定方法
已经有5人回复
- 【求助】土壤脲酶活性测定中的问题
已经有47人回复
