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求助：过氧化物酶提取及活性测定，颜色、吸光度都无变化
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本人最近在做椰肉中的过氧化物酶的提取及活性测定方法如下： 5g椰肉加35ml缓冲液研磨，4℃今天10min，13000g离心30分钟，取上清液。其中缓冲液分别做了一下几种: ph8.8 50mM tris-hcl、ph7.8 0.1mM磷酸缓冲液、ph7.0 0.1mM 磷酸缓冲液。 活性测定如下： 3.0mL 25mM愈创木酚（0.05m ph7.8 或7.0 配制，或者0.05m tris-hcl ph5.5），200ul（400,或500或1000）酶液，200ul 0.5M 过氧化氢，470nm，30℃测定。 按照这方法提取测定，470 吸光值始终不变，有气泡生成但无茶褐色物质生成，不知道什么原因啊，特想各位大神求助，新手刚注册，1个金币意思意思哈 另外我尝试了用—20℃丙酮做丙酮粉后磷酸缓冲液溶解测定，依旧测不出来，但英文文献里边采用ph 8.8 tris-hcl提取，ph5.5测定，结果活性还不错的 |
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2楼2012-08-22 21:43:22
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