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稻草人的学习

银虫 (小有名气)

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[求助] 大肠杆菌基因敲除

大家好，我正准备做基因敲除，可是对于敲出的知识还不懂，是个门外汉，敲除都需要做哪些准备，我想用抗性基因做标记，怎么设计打靶基因？还有引物?
请好心虫友帮助，谢谢。

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1楼 2013-09-13 10:44:50

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Haibara_Ai

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-13 22:20:36

One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10829079

Recombineering: a homologous recombination-based method of genetic engineering
http://www.nature.com/nprot/jour ... nprot.2008.227.html

第一个是pkd46 第二个是psim 第二个效率高点

marker 如果要loopout，可以用flp（设计序列）+pcp20（质粒）

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2楼2013-09-13 21:20:52

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引用回帖:

2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-09-13 21:20:52
One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10829079

Recombineering: a homologous recombination-based method of gen ...

能不能通俗点，我还不怎么了解具体是怎么回事。比如，引物，同源臂，抗性基因在打靶基因上的位置关系，作用什么的，谢谢。

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3楼2013-09-14 10:23:51

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