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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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对月流珠

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于PCR,请各位虫友帮忙

亲爱的虫友们,我现在在P一个全长基因,我设计了一个引物,两端加了酶切位点,前两次PCR,是出来了条带的,大小也是对的。自从上上周六那次PCR,相同的体系,相同的条件,就没有条带了。开始以为酶失效了,买了新酶,换了新dNTP,没有条带;基因组跑了电泳,没有问题;基因组P这个基因的中间片段,也能出来条带,可就是P不出全长;重新提了基因组再P,没有条带;重新稀释了引物,木有条带;重新合成了引物,也没有条带;我都怀疑pcr仪坏了,p了一个已知基因,结果能p出来。我还做了一个退火温度的梯度PCR,没有条带;又做了一个模板浓度梯度PCR,依然没有条带。现在是一片茫然啊,求虫友们指教啊。

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514278815

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
对月流珠: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-09-02 11:22:04
你上周PCR产物还有的话稀释一下P一次,如果能P出来证明你的基因组可能有问题的。有的时候手气不好,可以换个人帮你做一下;你已经做了很多尝试,确定体系和反应条件没问题的话,PCR仪也是可以考虑的,有的PCR孔可能是坏掉的,我们实验室就有一台有的空不能用的。
2楼2013-09-02 10:43:09
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对月流珠

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 514278815 at 2013-09-02 10:43:09
你上周PCR产物还有的话稀释一下P一次,如果能P出来证明你的基因组可能有问题的。有的时候手气不好,可以换个人帮你做一下;你已经做了很多尝试,确定体系和反应条件没问题的话,PCR仪也是可以考虑的,有的PCR孔可能 ...

灰常有用 谢谢 我试试 也许 真的是有的孔是坏掉的
3楼2013-09-02 11:22:40
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