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对月流珠

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于PCR，请各位虫友帮忙

亲爱的虫友们，我现在在P一个全长基因，我设计了一个引物，两端加了酶切位点，前两次PCR，是出来了条带的，大小也是对的。自从上上周六那次PCR，相同的体系，相同的条件，就没有条带了。开始以为酶失效了，买了新酶，换了新dNTP，没有条带；基因组跑了电泳，没有问题；基因组P这个基因的中间片段，也能出来条带，可就是P不出全长；重新提了基因组再P，没有条带；重新稀释了引物，木有条带；重新合成了引物，也没有条带；我都怀疑pcr仪坏了，p了一个已知基因，结果能p出来。我还做了一个退火温度的梯度PCR，没有条带；又做了一个模板浓度梯度PCR，依然没有条带。现在是一片茫然啊，求虫友们指教啊。

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1楼 2013-09-02 09:41:02
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514278815

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
对月流珠: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-09-02 11:22:04
你上周PCR产物还有的话稀释一下P一次，如果能P出来证明你的基因组可能有问题的。有的时候手气不好，可以换个人帮你做一下；你已经做了很多尝试，确定体系和反应条件没问题的话，PCR仪也是可以考虑的，有的PCR孔可能是坏掉的，我们实验室就有一台有的空不能用的。
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2楼2013-09-02 10:43:09
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对月流珠

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 514278815 at 2013-09-02 10:43:09
你上周PCR产物还有的话稀释一下P一次，如果能P出来证明你的基因组可能有问题的。有的时候手气不好，可以换个人帮你做一下；你已经做了很多尝试，确定体系和反应条件没问题的话，PCR仪也是可以考虑的，有的PCR孔可能 ...

灰常有用 谢谢 我试试 也许 真的是有的孔是坏掉的
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3楼2013-09-02 11:22:40
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