应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 实时荧光定量PCR过程问题
51/1返回列表
查看: 4492  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

孙小爽

铁虫 (初入文坛)

[求助] 实时荧光定量PCR过程问题已有2人参与

用ABI7500在进行实时荧光定量时，退火温度一定要60℃吗？还是根据引物来？每次的结果都有黄色的三角符号出现在上面，是引物出现问题吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-08-28 17:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙小爽

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2013-08-28 20:32:49
引物的退火温度当然要看你设计的引物了，退火温度高在60度以上就可以两步法，低的话就三步法，都是根据引物合成报告单上的温度设定的。ABI没用过，第二个问题没法回答。

很感谢，还请问在realtime之前需要用引物和cDNA做一下常规pcr确定退火温度和引物可否适用吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-29 08:29:28
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-29 21:14:15
引物的退火温度当然要看你设计的引物了，退火温度高在60度以上就可以两步法，低的话就三步法，都是根据引物合成报告单上的温度设定的。ABI没用过，第二个问题没法回答。
赞一下 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
2楼2013-08-28 20:32:49
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

跳舞的骆驼

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-29 21:14:24
退火温度不一定是60度,根据引物来制定退火温度的.另外,如果可能,你的引物务必要在常规的pcr上实验下,确定退火温度以及最主要的是没有引物二聚体. 结果中出现了黄三角是因为你的产物出现了非特异性扩增,或者你的引物二聚体特别多.
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-08-29 08:44:38
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙小爽

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 跳舞的骆驼 at 2013-08-29 08:44:38
退火温度不一定是60度,根据引物来制定退火温度的.另外,如果可能,你的引物务必要在常规的pcr上实验下,确定退火温度以及最主要的是没有引物二聚体. 结果中出现了黄三角是因为你的产物出现了非特异性扩增,或者你的引物 ...

那麻烦请问您 需要怎样设计引物减少非特异性扩增呢？谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-29 08:48:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭