24小时热门版块排行榜    

查看: 1159  |  回复: 4

lhf903

金虫 (正式写手)

[求助] 土壤总DNA真菌PCR突然扩不出来了

土壤总DNA真菌PCR,通用引物NS1F,FungR。
     程序95℃ 5min,35cycles 95℃ 1min,57℃ 1min,72℃ 1min,最后72℃ 10min。一直扩得很好,前段时间扩不出来后,退火温度降到55℃扩出来了,没过几天55℃也扩不出来了,退火温度再往下降也没用了。
     不知道什么原因,模板没用问题,引物定了新的,试剂也没问题,现在找不出原因了~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhsp07

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-01 17:07:32
lhf903: 金币+20, 有帮助 2013-09-01 18:31:22
不太清楚这对引物。之前能扩出来,过了几天就扩不出来了,难道是因为这几天中DNA反复冻融,降解了?
扩增不出来的话,稀释试试吧,一般土壤DNA中腐植酸等杂质含量比较高,影响酶活性,不过如果0D260/230大于2的话,应该不是杂质的问题。
车到山前必有路!
2楼2013-08-29 08:30:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhf903

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhsp07 at 2013-08-29 08:30:01
不太清楚这对引物。之前能扩出来,过了几天就扩不出来了,难道是因为这几天中DNA反复冻融,降解了?
扩增不出来的话,稀释试试吧,一般土壤DNA中腐植酸等杂质含量比较高,影响酶活性,不过如果0D260/230大于2的话, ...

看了很多PCR的注意事项,昨天刚稀释模板扩了一下,还是没扩出来。。。。。。。。
3楼2013-09-01 12:26:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhsp07

金虫 (小有名气)

检测OD值了吗?我之前做的是单菌的DNA,由于OD260/230不合适而PCR不成功的,都是做稀释的,5倍到100倍不等,当然还要考虑DNA的含量。
我也挺好奇你的模板为什么会突然扩不出来,楼主找到原因后,麻烦告知一下啊。
车到山前必有路!
4楼2013-09-01 20:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

二月smile

新虫 (初入文坛)

楼主找到原因了吗?我也是真菌扩不出来。
5楼2015-07-17 10:39:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lhf903 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-15 7/350 2026-03-16 09:43 by 闲人终南山
[基金申请] 国自科面上基金字体 +4 iwuli 2026-03-12 5/250 2026-03-15 17:07 by 风云无泪
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 材料与化工 一志愿山大 321分 求调剂 +7 每天散步 2026-03-09 8/400 2026-03-14 02:18 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +14 王晓阳- 2026-03-09 19/950 2026-03-14 02:05 by JourneyLucky
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。,。,。,。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 一志愿华中师范071000,325求调剂 +5 RuitingC 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:43 by hyswxzs
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
信息提示
请填处理意见