24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1183  |  回复: 4

lhf903

金虫 (正式写手)

[求助] 土壤总DNA真菌PCR突然扩不出来了

土壤总DNA真菌PCR,通用引物NS1F,FungR。
     程序95℃ 5min,35cycles 95℃ 1min,57℃ 1min,72℃ 1min,最后72℃ 10min。一直扩得很好,前段时间扩不出来后,退火温度降到55℃扩出来了,没过几天55℃也扩不出来了,退火温度再往下降也没用了。
     不知道什么原因,模板没用问题,引物定了新的,试剂也没问题,现在找不出原因了~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhsp07

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-01 17:07:32
lhf903: 金币+20, 有帮助 2013-09-01 18:31:22
不太清楚这对引物。之前能扩出来,过了几天就扩不出来了,难道是因为这几天中DNA反复冻融,降解了?
扩增不出来的话,稀释试试吧,一般土壤DNA中腐植酸等杂质含量比较高,影响酶活性,不过如果0D260/230大于2的话,应该不是杂质的问题。
车到山前必有路!
2楼2013-08-29 08:30:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhf903

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhsp07 at 2013-08-29 08:30:01
不太清楚这对引物。之前能扩出来,过了几天就扩不出来了,难道是因为这几天中DNA反复冻融,降解了?
扩增不出来的话,稀释试试吧,一般土壤DNA中腐植酸等杂质含量比较高,影响酶活性,不过如果0D260/230大于2的话, ...

看了很多PCR的注意事项,昨天刚稀释模板扩了一下,还是没扩出来。。。。。。。。
3楼2013-09-01 12:26:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhsp07

金虫 (小有名气)

检测OD值了吗?我之前做的是单菌的DNA,由于OD260/230不合适而PCR不成功的,都是做稀释的,5倍到100倍不等,当然还要考虑DNA的含量。
我也挺好奇你的模板为什么会突然扩不出来,楼主找到原因后,麻烦告知一下啊。
车到山前必有路!
4楼2013-09-01 20:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

二月smile

新虫 (初入文坛)

楼主找到原因了吗?我也是真菌扩不出来。
5楼2015-07-17 10:39:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lhf903 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +11 梁富贵险中求 2026-04-04 13/650 2026-04-06 07:24 by houyaoxu
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-05 4/200 2026-04-05 22:49 by lbsjt
[考研] 282求调剂 +7 aaa车辆 2026-04-02 11/550 2026-04-05 17:24 by yulian1987
[考研] 288求调剂 +7 没有答案_ 2026-04-05 7/350 2026-04-05 17:01 by yulian1987
[考研] 工科08专硕机械275求调剂 +3 AaAa7420 2026-04-02 3/150 2026-04-05 13:26 by jp9609
[考研] 353求调剂 +10 MayUxw1 2026-04-03 10/500 2026-04-05 09:23 by 无际的草原
[考研] 考研调剂 +11 小sun要好运 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:02 by qlm5820
[考研] 材料工程085601数二英一335求调剂 +6 双马尾痞老板2 2026-03-31 6/300 2026-04-04 22:29 by hemengdong
[考研] 材料调剂 +15 一样YWY 2026-04-01 15/750 2026-04-04 22:23 by hemengdong
[考研] 材料科学与工程考研 +10 拯救皮特托先生 2026-04-02 10/500 2026-04-03 23:57 by userper
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[考研] 286求调剂 +8 lim0922 2026-04-02 8/400 2026-04-03 20:19 by rzh123456
[考研] 求调剂!生物与医药专硕 +4 逆转陆先生 2026-04-01 5/250 2026-04-03 08:33 by Jaylen.
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 08开头看过来!!! +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 261求B区调剂 +5 明仔· 2026-04-01 7/350 2026-04-02 11:17 by 邹尉尉
[考研] 307分求调剂 +14 (o~o) 2026-03-31 15/750 2026-04-01 20:43 by longlotian
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
[考研] 288资源与环境专硕求调剂,不限专业,有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
[考研] 一志愿西电085401数一英一299求调剂 六级521 +4 爱吃大鸭梨 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:51 by 搏击518
信息提示
请填处理意见