应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 土壤总DNA真菌PCR突然扩不出来了
51/1返回列表
查看: 1113  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lhf903

金虫 (正式写手)

[求助] 土壤总DNA真菌PCR突然扩不出来了

土壤总DNA真菌PCR，通用引物NS1F，FungR。
     程序95℃ 5min，35cycles 95℃ 1min，57℃ 1min，72℃ 1min，最后72℃ 10min。一直扩得很好，前段时间扩不出来后，退火温度降到55℃扩出来了，没过几天55℃也扩不出来了，退火温度再往下降也没用了。
     不知道什么原因，模板没用问题，引物定了新的，试剂也没问题，现在找不出原因了~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-28 15:24:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhf903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhsp07 at 2013-08-29 08:30:01
不太清楚这对引物。之前能扩出来，过了几天就扩不出来了，难道是因为这几天中DNA反复冻融，降解了？
扩增不出来的话，稀释试试吧，一般土壤DNA中腐植酸等杂质含量比较高，影响酶活性，不过如果0D260/230大于2的话， ...

看了很多PCR的注意事项，昨天刚稀释模板扩了一下，还是没扩出来。。。。。。。。
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-01 12:26:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

zhsp07

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-01 17:07:32
lhf903: 金币+20, ★有帮助 2013-09-01 18:31:22
不太清楚这对引物。之前能扩出来，过了几天就扩不出来了，难道是因为这几天中DNA反复冻融，降解了？
扩增不出来的话，稀释试试吧，一般土壤DNA中腐植酸等杂质含量比较高，影响酶活性，不过如果0D260/230大于2的话，应该不是杂质的问题。
赞一下 回复此楼
车到山前必有路!
2楼2013-08-29 08:30:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhsp07

金虫 (小有名气)
检测OD值了吗？我之前做的是单菌的DNA，由于OD260/230不合适而PCR不成功的，都是做稀释的，5倍到100倍不等，当然还要考虑DNA的含量。
我也挺好奇你的模板为什么会突然扩不出来，楼主找到原因后，麻烦告知一下啊。
赞一下(2人) 回复此楼
车到山前必有路!
4楼2013-09-01 20:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

二月smile

新虫 (初入文坛)
楼主找到原因了吗？我也是真菌扩不出来。
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-17 10:39:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭