| 查看: 5248 | 回复: 8 | ||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||||
[交流]
双顺反子 表达载体的构建——求助！
|
||||||
|
正在构建双顺反子表达载体，用的是pet-32a 有几个问题请教高人指点 1、第一个基因需不需要ATG还是直接用成熟肽，终止密码子需不需要去掉； 2、第二个基因之前除了要加RBS序列还需要添加别的序列吗，ATG是否需要带着；3、第二个基因从哪里开始编码是否RBS会被识别成三联密码子翻译成相应氨基酸； 4、第二个基因不加RBS，第一个基因不加终止密码子，是否会使两条多肽串联起来，这样形式的蛋白经过变性复性能否具有相应的生物学活性（两个多肽，是同一蛋白的两个亚单位） |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 药学科研资料 | 核酸方面 |
» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有211人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- pMD18-T载体连接了目的片段后双酶切鉴定出现了好多条带 怎么回事?
已经有6人回复
- 组氨酸标签的问题
已经有27人回复
- 一条成熟mRNA可否翻译两条蛋白？
已经有9人回复
- 【求助/交流】表达载体pCAMBIA1304表达顺序看不懂
已经有12人回复
- micro ? small ? short ? RNA
已经有6人回复
- 【求助/交流】表达载体转化后,提取的质粒和原来不一样了啊
已经有5人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌有的是表达载体的宿主，有些事克隆载体的宿主，他们的区别在哪�
已经有10人回复
- 【求助/交流】PET32a 表达载体和PMD19-T 克隆载体，是否可以用之前养在DH5a里扩增？
已经有12人回复
- 【求助/交流】真核细胞到底是单顺反子还是多顺反子？？？
已经有5人回复
- 【求助/交流】目的基因连接表达载体后涂板不长菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】什么是组成型表达载体
已经有4人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母表达载体的构建问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子？
已经有6人回复
- 【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因
已经有23人回复
- 【求助/交流】原核表达载体pGEX-4T-1对应的表达菌株
已经有6人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母真核表达载体构建和连接的问题
已经有6人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
江西师大化学工程学院2026招收化学化工相关调剂生110+人
+2/924
-
寻找那个能让“稳定生活”变得“更有趣”的你
+1/154
-
电力全国重点实验室双一流A类长江学者团队招2026年全日制博士1-2名
+2/130
-
2026时光标本=已经注册了 5608 天，合计 16 年
+1/127
-
北京信息科技大学联合清华大学某国家重点实验室，联合培养硕生、博生，并长期招博士后
+1/92
-
淮北师范大学 化学 招收2026 硕士研究生调剂
+1/89
-
曲阜师范大学刘中秋团队招化学、材料科学与工程专业调剂生
+1/86
-
【最后机会】深圳大学2026级土木工程博士急招
+5/65
-
设备故障诊断与预测性维护方向-硕博研究生兼职
+1/37
-
澳门理工大学人工智能智慧康养方向26 年9月入学博士招生有奖学金
+1/32
-
吉林大学张越涛教授团队长期招收博士后、2026年入学博士研究生和科研助理
+1/15
-
26届计算机、电子信息类、电科、控制、通信考研T j信息pp骏：74+08+76+6+20/
+1/14
-
26届计算机、电子信息类、电科、控制、通信考研T j信息pp骏：74+08+76+6+20/
+1/14
-
谢和平院士团队招收2026年度深地科学、岩石力学、资源能源开发领域的博士生1名
+1/9
-
中国科学院国家级人才团队博士后招聘启示
+1/8
-
西安电子科学大学杭州研究院刘丽香教授招收智能多模态传感器和微型储能器件方向博士
+1/8
-
湖北工业大学2026年博士研究生（生物医药专博+轻工技术与工程学博）
+1/5
-
内蒙古大学青年长江学者王蕾教授团队2026年硕士调剂公告。
+1/5
-
西安工程大学环境与化学工程学院26年硕士研究生招生咨询（26年9月入学）
+1/4
-
287一志愿天津理工电气工程求调剂
+1/2
3楼2013-08-28 10:18:26
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单单VS双双: 金币+5 2013-08-28 10:19:09
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-28 13:53:06
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单单VS双双: 金币+5 2013-08-28 10:19:09
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-28 13:53:06
|
1. 如果你指向表达成熟肽，可以去掉原序列里的信号肽编码序列，但是需要有ATG作为起始密码子。这样表达出来的产物比成熟肽多一个Met。如果你不想把两个基因融合表达，就不要去掉第一个序列的终止密码子。 2. 第二个基因之前不用加核糖体结合位点。pet-32a用的是强启动子，没有终止子序列的情况下核糖体不会脱落。第二个基因的ATG需要保留，第二个基因就是从其ATG开设表达。 3. 两个序列之间不用保持阅读框，除非你想做成融合蛋白。 3. 融合蛋白是否保留原来的活性的确要看是否正确折叠成独立结构，一般会在两个蛋白之间加linker。 |
2楼2013-08-28 02:29:54
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-28 19:21:27
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-28 19:21:27
|
1. 你可以选择不同的酶切位点克隆来实现表达产物带什么tag。pET-32a的确可以在N端融合多个tag，并且这些tag是可以在纯化后切除的。这种情况，你实际上是先表达出带标签的融合蛋白，所以第一个目的基因的ATG可以不要，但要注意序列的阅读框与前面的融合标签相符，避免移码。 2. his-tag留一个就可以了。载体这样设计是为了克隆方便。有些蛋白的N端或者C端对活性很重要，只有一边的标签纯化出来的蛋白有活性。 3. 第一个基因的终止密码子不会影响第二个基因的表达，有终止密码子可以避免形成融合蛋白。当然如果你想做融合表达的话，应该去掉第一个基因的终止密码子。第二个基因的TAA如果保留，表达出来的蛋白的C端是没有his-tag。 |
4楼2013-08-28 11:40:12
5楼2013-08-28 12:38:24
