| 查看: 5353 | 回复: 8 | ||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||||
[交流]
双顺反子 表达载体的构建——求助！
|
||||||
|
正在构建双顺反子表达载体，用的是pet-32a 有几个问题请教高人指点 1、第一个基因需不需要ATG还是直接用成熟肽，终止密码子需不需要去掉； 2、第二个基因之前除了要加RBS序列还需要添加别的序列吗，ATG是否需要带着；3、第二个基因从哪里开始编码是否RBS会被识别成三联密码子翻译成相应氨基酸； 4、第二个基因不加RBS，第一个基因不加终止密码子，是否会使两条多肽串联起来，这样形式的蛋白经过变性复性能否具有相应的生物学活性（两个多肽，是同一蛋白的两个亚单位） |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 药学科研资料 | 核酸方面 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有92人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- pMD18-T载体连接了目的片段后双酶切鉴定出现了好多条带 怎么回事?
已经有6人回复
- 组氨酸标签的问题
已经有27人回复
- 一条成熟mRNA可否翻译两条蛋白？
已经有9人回复
- 【求助/交流】表达载体pCAMBIA1304表达顺序看不懂
已经有12人回复
- micro ? small ? short ? RNA
已经有6人回复
- 【求助/交流】表达载体转化后,提取的质粒和原来不一样了啊
已经有5人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌有的是表达载体的宿主，有些事克隆载体的宿主，他们的区别在哪�
已经有10人回复
- 【求助/交流】PET32a 表达载体和PMD19-T 克隆载体，是否可以用之前养在DH5a里扩增？
已经有12人回复
- 【求助/交流】真核细胞到底是单顺反子还是多顺反子？？？
已经有5人回复
- 【求助/交流】目的基因连接表达载体后涂板不长菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】什么是组成型表达载体
已经有4人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母表达载体的构建问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子？
已经有6人回复
- 【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因
已经有23人回复
- 【求助/交流】原核表达载体pGEX-4T-1对应的表达菌株
已经有6人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母真核表达载体构建和连接的问题
已经有6人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
延安大学化学与化工学院接收化学专业调剂生，4月12日下午复试（工科、理学均可调剂）
+1/190
-
陕科大环境学院招收0857和0830调剂考生【可跨门类，最后2两小时】
+1/186
-
★★热帖★★0860生物与医药调剂考生看过来，河北大学化学与材料科学学院
+2/102
-
退火及测试
+1/92
-
江苏师范大学化学及材料专业招收调剂研究生
+1/86
-
2026秋季全奖港博招生：硬件安全 / 芯片设计 / AI算力方向博士招生
+1/84
-
山西大学光量子技术与器件国家实验室招收物理、光学、材料专业2026级博士、硕士研究生
+1/38
-
【紧急招生】大连工业大学唐晶晶招收2026级化学/化工类调剂硕士生（最后一天）
+1/37
-
大连大学-贵州省煤炭洁净利用重点实验室联合培养研究生 化学6人+环境工程8人
+1/20
-
做流体实验还在凑设备？这套高精密流场可视化方案真的适合高校吗？
+1/11
-
河南农业大学理学院招收化学（学硕）和材料与化工（专硕）专业硕士调剂生2名
+1/10
-
北京化工大学材料学院高分子微针实验室招收调剂
+1/9
-
福建中医药大学药学院二轮调剂-中药学、药物化学-仅剩6个名额
+2/8
-
大湾区大学李红庚课题组招聘研究助理
+1/7
-
烟台大学精准材料高等研究院26年材料方向研究生招生
+1/5
-
福建理工大学学硕专业代码08开头还有调剂名额
+1/5
-
祈福
+1/3
-
淮北师范大学能源科学与工程学院研究生招收调剂
+1/2
-
人工智能与计算化学交叉研究方向 接受调剂
+1/2
-
鲁东大学水产学院杨建敏教授课题组，2026年水产学硕接收调剂3-4人
+1/2
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-28 19:21:27
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-28 19:21:27
|
1. 你可以选择不同的酶切位点克隆来实现表达产物带什么tag。pET-32a的确可以在N端融合多个tag，并且这些tag是可以在纯化后切除的。这种情况，你实际上是先表达出带标签的融合蛋白，所以第一个目的基因的ATG可以不要，但要注意序列的阅读框与前面的融合标签相符，避免移码。 2. his-tag留一个就可以了。载体这样设计是为了克隆方便。有些蛋白的N端或者C端对活性很重要，只有一边的标签纯化出来的蛋白有活性。 3. 第一个基因的终止密码子不会影响第二个基因的表达，有终止密码子可以避免形成融合蛋白。当然如果你想做融合表达的话，应该去掉第一个基因的终止密码子。第二个基因的TAA如果保留，表达出来的蛋白的C端是没有his-tag。 |
4楼2013-08-28 11:40:12
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单单VS双双: 金币+5 2013-08-28 10:19:09
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-28 13:53:06
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单单VS双双: 金币+5 2013-08-28 10:19:09
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-28 13:53:06
|
1. 如果你指向表达成熟肽，可以去掉原序列里的信号肽编码序列，但是需要有ATG作为起始密码子。这样表达出来的产物比成熟肽多一个Met。如果你不想把两个基因融合表达，就不要去掉第一个序列的终止密码子。 2. 第二个基因之前不用加核糖体结合位点。pet-32a用的是强启动子，没有终止子序列的情况下核糖体不会脱落。第二个基因的ATG需要保留，第二个基因就是从其ATG开设表达。 3. 两个序列之间不用保持阅读框，除非你想做成融合蛋白。 3. 融合蛋白是否保留原来的活性的确要看是否正确折叠成独立结构，一般会在两个蛋白之间加linker。 |
2楼2013-08-28 02:29:54
3楼2013-08-28 10:18:26
5楼2013-08-28 12:38:24
