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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5’RACE巢氏PCR
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零慧

新虫 (初入文坛)

[交流] 5’RACE巢氏PCR已有2人参与

本人最近做5‘RACE，第一轮巢氏PCR，用降落PCR的方法跑了20个循环，做完后立即做第二轮PCR，也是降落PCR，（把第一轮产物放入-20冰箱内保存），随后用第二轮产物电泳，会有很亮的条带，确认哪些引物有条带后，再以第一轮产物作为模板进行PCR，体系，程序，反应物都一样，结果就诡异了，完全没有条带，请问论坛里的高手，这会是什么问题呢？5’RACE的巢氏PCR问题Sample Text
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我的生命里只有甘蔗
1楼2013-08-27 22:02:28
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huahu3600

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第一轮PCR产物做模板时稀释了吗？
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3楼2013-11-21 12:11:21
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jpyan0903

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-21 08:53:53
我做5‘RACE时巢氏PCR有目的条带出现，回收克隆后，菌落PCR发现有几条大小的条带，经测序、比对后发现均不是木点目的条带，只能找到接头引物序列，找不到NGSP序列。
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2楼2013-11-20 23:17:53
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零慧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-11-21 12:11:21
第一轮PCR产物做模板时稀释了吗？

没有稀释，最近忙上课都没上来看看了，唉！不好意思
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我的生命里只有甘蔗
4楼2013-12-15 15:40:56
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huahu3600

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 零慧 at 2013-12-15 15:40:56
没有稀释，最近忙上课都没上来看看了，唉！不好意思...

PCR产物做模板要稀释的，不然里面杂质太多会影响的。
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5楼2013-12-16 14:54:58
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