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零慧

新虫 (初入文坛)

[交流] 5’RACE巢氏PCR 已有2人参与

本人最近做5‘RACE,第一轮巢氏PCR,用降落PCR的方法跑了20个循环,做完后立即做第二轮PCR,也是降落PCR,(把第一轮产物放入-20冰箱内保存),随后用第二轮产物电泳,会有很亮的条带,确认哪些引物有条带后,再以第一轮产物作为模板进行PCR,体系,程序,反应物都一样,结果就诡异了,完全没有条带,请问论坛里的高手,这会是什么问题呢?5’RACE的巢氏PCR问题Sample Text
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我的生命里只有甘蔗
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jpyan0903

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-21 08:53:53
我做5‘RACE时巢氏PCR有目的条带出现,回收克隆后,菌落PCR发现有几条大小的条带,经测序、比对后发现均不是木点目的条带,只能找到接头引物序列,找不到NGSP序列。
2楼2013-11-20 23:17:53
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huahu3600

新虫 (小有名气)


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第一轮PCR产物做模板时稀释了吗?
3楼2013-11-21 12:11:21
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零慧

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-11-21 12:11:21
第一轮PCR产物做模板时稀释了吗?

没有稀释,最近忙上课都没上来看看了,唉!不好意思
我的生命里只有甘蔗
4楼2013-12-15 15:40:56
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huahu3600

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 零慧 at 2013-12-15 15:40:56
没有稀释,最近忙上课都没上来看看了,唉!不好意思...

PCR产物做模板要稀释的,不然里面杂质太多会影响的。
5楼2013-12-16 14:54:58
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