应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何避免引物二聚体
111/2返回列表12下一页
查看: 3420  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Eva2009

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 生物信息学 代谢毒理细胞生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-23 09:09:01
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

pypsak

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-08-23 11:39:41
1.可能模板有问题；模板浓度过小，适当加大模板量；
2.Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度；
3.取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的；这点我试过,效果还不错
4.所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性；
5.PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体。
6.增加循环数；
7.降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）；
8.若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对。
9.以上次的pcr产物作模板二次pcr，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50－100倍；
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2013-08-23 09:14:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Eva2009

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
3楼2013-08-23 11:29:57
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by Eva2009 at 2013-08-23 11:29:57
这些俺也在百度上搜过，有没有试过哪种方法啊。。。。怎么让阴性对照里面不出现引物二聚体...

二聚体很严重吗？有一点不影响特异扩增的话不用管它的吧~ 减少引物量，升高退火温度，加镁离子一起用嘛，实在不行重新设计引物呗，没多少钱。
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
4楼2013-08-23 12:53:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pypsak

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你跑的是Qpcr？普通pcr真没什么问题的
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-23 13:13:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-23 18:03:30
做PCR之前，把PCR仪提前打开，先让模块温度升到90度以上，再往里放PCR管。可以在一定程度上减少引物二聚体的产生，但是如果你的阴性对照引物二聚体很严重的话，是无法完全避免的。降低引物的加入量，适当提高Tm值，都可以减少引物二聚体的产生。
以上只是我的个人经验，你可以试一下，如果不行。还是重新设计引物较好。
赞一下 回复此楼
6楼2013-08-23 13:33:25
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eva2009

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2013-08-26 09:13:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eva2009

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
8楼2013-08-26 09:14:31
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eva2009

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
9楼2013-08-26 09:16:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-19 21:01:50
你可以在Primer Premier软件的 Pimer--->Search Criteria---->选Manual（在“Search Mode”框），同时点击“Search Parameters"进入人工搜索参数设置窗口，其中有“Dimer/Hairpin”，可以将“Search Stringency”设置为：very high或者 Moderate。该程序会对引物进行相关参数的搜索和筛选。

Good Luck！
赞一下 回复此楼
10楼2013-10-19 16:06:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Eva2009 的主题更新
111/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 aOn84t7OD1JN 2026-08-19 3/150 2026-08-19 22:40 by BqkHsOAGISWU
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 aOn84t7OD1JN 2026-08-19 4/200 2026-08-19 22:31 by BqkHsOAGISWU
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 PnssoZglMj3v 2026-08-19 5/250 2026-08-19 22:19 by BqkHsOAGISWU
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +54 医学老男孩 2026-08-13 121/6050 2026-08-19 20:28 by 医学老男孩
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 PnssoZglMj3v 2026-08-19 5/250 2026-08-19 17:42 by oCMhZAsgNFoO
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭