24小时热门版块排行榜    

查看: 2755  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zqxy1223

铁虫 (初入文坛)

[求助] 想请教一下做RACE时,特异性引物的设计问题,以及如何根据同源保守区设计引物?

我是一个做分子生物学的新手,老师也没太多时间知道,所以的问题都要靠自己摸索。所以我的问题在您看来若很弱智,请您耐心的解答,非常感谢。
    我想在利用RACE方法做植物上一个基因的全长,根据同源克隆法,利用DNAMAN比对序列后,如何选取保守区,选择保守区序列的位置和原则是什么?又如何根据保守区设计3‘引物和5’引物?还是先做3‘race,根据pcr产物再做5’race?非常感谢。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 RACE

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuzhu598

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zqxy1223 at 2013-08-24 10:05:39
因为我没有已知片段,我是不是应该先设计简并引物,P出一段序列,在做3‘端啊?...

不是简并引物,你找几个相似的物种来设计就可以了!
9楼2013-08-24 22:18:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

xuzhu598

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-23 11:45:40
首先得NCBI上找到相似物种的cDNA序列,比对下,根据同源保守区(就是物种之间都没有变化的序列)设计两条GSP,两者之间隔个100bp-200bp左右吧!3‘RACE简单点
3楼2013-08-22 21:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqxy1223

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xuzhu598 at 2013-08-22 21:33:39
首先得NCBI上找到相似物种的cDNA序列,比对下,根据同源保守区(就是物种之间都没有变化的序列)设计两条GSP,两者之间隔个100bp-200bp左右吧!3‘RACE简单点

可是我的这个基因我选取的保守区,设计的引物GC含量都很低,已经设计了多条,都很低,该怎么办?
4楼2013-08-23 15:23:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuzhu598

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zqxy1223 at 2013-08-23 15:23:03
可是我的这个基因我选取的保守区,设计的引物GC含量都很低,已经设计了多条,都很低,该怎么办?...

primer长度25-27bp左右吧,GC%有40吗?理论很多时候和实际不一样的,建议你多设计几条!3‘相对来说简单多了,问题应该不大。
5楼2013-08-23 20:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +10 yangfz 2026-03-17 10/500 2026-03-18 20:14 by walc
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +7 Liwangman 2026-03-15 7/350 2026-03-18 20:08 by walc
[考研] 材料专硕英一数二306 +4 z1z2z3879 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:00 by 楤哥
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +3 Ymlll 2026-03-18 5/250 2026-03-18 19:32 by Ymlll
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-18 3/150 2026-03-18 17:15 by 216的故事
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 9/450 2026-03-18 15:05 by stone_128
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +7 rare12345 2026-03-18 7/350 2026-03-18 14:31 by laoshidan
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +4 脱颖而出 2026-03-16 9/450 2026-03-18 14:13 by 脱颖而出
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂,科研和技能十分丰富,求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生,2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
信息提示
请填处理意见