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jxm520zyc

木虫 (正式写手)

[求助] western blot 内参β-actin图片异常

western blot 内参条带出现双带,求大神指点~
western blot 内参β-actin图片异常
2013-08-20 β-actin.jpg
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
jxm520zyc: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-08-24 12:03:49
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-25 01:55:12
gyesang: 回帖置顶 2013-08-25 01:55:14
1、现象:出现多条带,通常称为出现了非特异性条带(非你想要的条带,带想要的条带也出现。即1抗与杂蛋白接触了。)。
2、原因:非特异性条带的产生通常是因为1抗的原因,多克隆抗体经常会出现非特异性条带,单克隆抗体就基本不会出现。通常原因就是1抗浓度过高。
3、解决办法:换较大梳子,增加蛋白上样量,降低1抗浓度(按说明书两头及中间摸索浓度)。
4、补充:内参的特异性不影响发表论文和答辩。但目的蛋白要是出现双条明显带你就要解释清楚了。
9楼2013-08-24 10:11:00
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普通回帖

peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-21 12:20:24
可能是样品没有处理好,有些条带比较强,但是也只有一条带,再试试提高一抗浓度,降低二抗浓度时间。应该是初学者,多试试
2楼2013-08-21 12:01:03
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会不会是转膜中途胶动了????
我会绕一个圈,走回到实验室
3楼2013-08-21 13:00:12
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jxm520zyc

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-08-21 12:01:03
可能是样品没有处理好,有些条带比较强,但是也只有一条带,再试试提高一抗浓度,降低二抗浓度时间。应该是初学者,多试试

谢谢回复,我之前没有定量,想通过看参考基因来调整上样量~
学习中~
4楼2013-08-21 15:26:28
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jxm520zyc

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-08-21 13:00:12
会不会是转膜中途胶动了????

额?应该没有动吧~
学习中~
5楼2013-08-21 15:27:56
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-21 21:22:11
也有可能是一抗的特异性不高导致的。可以适当增加一抗的稀释倍数。。
6楼2013-08-21 16:15:25
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 20:56:34
1 有可能是膜没有封闭好,导致一抗孵育的时候出现非特异性结合

2 你上样量是不是有点低 感觉你这个膜 如果是 β-actin的话 应该是背景非常低才对 因为它含量很高 然后化学发光强度超级强的是
7楼2013-08-23 22:38:55
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fantasist001

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-08-25 01:54:57
胶动的条带不会这么清晰吧,也不像气泡造成。
既然是同一张膜,所有条件都一样,这个差别很可能是样品之间的差别造成。
可能是自然规律,也可能是样品制备过程出现差异。
回顾一下看看,是否有造成蛋白降解的因素。
8楼2013-08-23 23:22:51
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

对哦,蛋白降解原因很大
一直向前!
10楼2013-08-28 13:14:16
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